微小RNA在结核杆菌逃逸宿主免疫杀伤中的作用

微小RNA(microRNAs,miRNAs)是一类长度为20~25个核苷酸的非编码RNA,可抑制靶基因转录后表达,进而影响细胞的生长功能。研究表明:miRNAs可通过抑制凋亡、抑制吞噬体溶酶体融合、干扰信号转导、抑制ROS(reactive oxygen species)和RNS(reactive nitrogen species)毒性反应、抑制自噬等机制参与结核分枝杆菌抵抗宿主细胞免疫杀伤的过程。本文简要介绍miRNAs在结核分枝杆菌逃逸宿主细胞免疫杀伤过程中的作用,进一步揭示结核病的发病机制。     

结核分枝杆菌Rv3872与Rv3873基因的克隆及重组真核表达载体的构建

目的:克隆结核分枝杆菌Rv3872与Rv3873基因,并构建Rv3872与Rv3873基因的重组真核表达载体,为研究这2个基因的功能奠定实验基础。方法:利用PCR技术克隆Rv3872与Rv3873基因序列,将其连接至pMD-18T载体,鉴定成功后将Rv3872与Rv3873序列插入真核表达载体pEGFP-C1,构建重组pEGFP-C1-Rv3872和pEGFP-C1-Rv3873真核表达载体,并进行质粒PCR、双酶切以及测序验证。结果:经测序比对后,Rv3872与Rv3873序列与Gene Bank中公布的基因序列一致,重组载体构建成功。结论:成功构建重组pEG-FP-C1-Rv3872和pEGFP-C1-Rv3873真核表达载体。     

抑制miR-29a-3p表达对小鼠巨噬细胞凋亡的影响及机制

【目的】研究miR-29a-3p下调表达对小鼠巨噬细胞凋亡及相关基因表达的影响,为探讨结核病发病机制、研发新的诊断与治疗方法提供依据。【方法】将重组抑制载体p EZX-AM02-miR-29a-3p转染RAW264.7细胞,24、36和48 h荧光显微镜观察转染效率,Real time-PCR法检测miR-29a-3p及凋亡相关基因caspase3、caspase7、caspase8、Bcl-2、Mcl-1和Bax的表达水平,流式细胞术检测RAW264.7细胞的凋亡率。【结果】重组抑制载体转染后,细胞内miR-29a-3p表达水平明显下降;而caspase7、caspase8、Bcl-2、Mcl-1和Bax等基因的表达出现不同程度的上调;流式细胞术分析发现随着转染时间延长,细胞凋亡率增加,且36 h凋亡率最高。【结论】p EZX-AM02-miR-29a-3p重组载体可抑制小鼠巨噬细胞中miR-29a-3p的表达,通过靶向上调caspase7、caspase8、Bcl-2和Mcl-1等基因的表达促进巨噬细胞的凋亡。