枯草芽孢杆菌突变株的构建及其对猪肺泡巨噬细胞(MΦ3D4/2)免疫因子表达的影响

试验旨在研究枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)不萌发芽孢和不生孢营养体对猪肺泡巨噬细胞(MΦ3D4/2)免疫因子表达的影响。利用同源重组敲除B.subtilis PY79芽孢萌发基因clW-gerD和生孢早期基因spo0A,构建芽孢不萌发突变株B.subtilis clW-gerD-和不生孢突变株B.subtilis spo0A-,提取基因组DNA进行PCR检测;结合革兰氏染色和萌发率检测,分别对构建的B.subtilis芽孢不萌发突变株和不生孢突变株进行萌发和生孢能力鉴定;将B.subtilis clW-gerD-和B.subtilis spo0A-分别与猪肺泡巨噬细胞共培养,用ELISA试剂盒检测细胞因子分泌表达水平。结果表明:(1)成功获得不萌发突变株B.subtilis clW-gerD-和不生孢突变株B.subtilis spo0A-;(2)萌发和生孢能力检测结果显示,B.subtilis clWgerD-完全丧失芽孢萌发能力;显微镜观察和生孢率检测表明不生孢突变株B.subtilis spo0A-丧失了生孢能力;(3)B.subtilis clW-gerD-极显著的促进了细胞因子IL-6的表达(P0.01);B.subtilis clW-gerD-、B.subtilis PY79和B.subtilis spo0A-对细胞因子IL-1β、IL-10和IL-8的表达量无显著影响(P0.05)。B.subtilis clW-gerD-可刺激巨噬细胞分泌促炎因子IL-6,增强MΦ3D4/2细胞的炎症反应,提高机体的抗感染能力。