马岗鹅TLR4基因的克隆及组织表达分析

为了解马岗鹅天然免疫受体TLR4基因特点及该基因在马岗鹅脏器的表达差异,研究扩增马岗鹅脾脏中的TLR4基因并测序,分析和预测TLR4基因核酸和蛋白特征,应用real-time PCR检测TLR4 mRNA在马岗鹅体内脏器的表达差异。结果显示:马岗鹅的TLR4基因大小为2 611 bp,编码氨基酸843个,分子质量为96.17 ku,理论等电点为7.55,含有30个氨基酸组成的信号肽,蛋白整体表现为疏水性;相似性分析和系统发育树分析表明,马岗鹅的TLR4基因与绿头鸭、原鸡等禽类动物有着较高的相似性;TLR4基因在马岗鹅的脾、法氏囊、胸腺、肺、肠等富含淋巴组织或细胞的器官中相对转录量较高。研究结果为进一步探讨马岗鹅的免疫机制奠定了基础。     

冷应激对雏鹌鹑十二指肠肠道菌群的影响

为探索促进动物冷适应的方法,使动物在寒冷环境中能够保持正常生理机能,在建立雏鹌鹑急、慢性冷应激模型的基础上,应用变性凝胶电泳技术（ＰＣＲ-ＤＧＧＥ）,检测急、慢性冷应激对十二指肠组织肠道菌群的影响．结果表明,急、慢性冷应激均可以导致雏鹌鹑十二指肠内肠道微生物数量和种类的改变．冷应激会引起雏鹌鹑肠道生物屏障功能受损．     

广东省鹅细小病毒的分离及序列分析

从广东省鹅主要养殖区分离出2株鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV),分别命名为GDQY2017和GDYJ2017,纯化后测序分析。VP基因的系统发育分析结果表明,2株GPV单独形成一个分支,与疫苗株距离较远。选择压力分析结果表明,分离株的1位点有强烈的净化选择。氨基酸分析结果显示,与疫苗株相比,分离的GPV菌株含有22个不同的氨基酸残基,并且具有阳性选择的位点(Arg116Gln)。     

荧光定量PCR检测鹅细小病毒体系的建立和应用

为解决在养殖过程中多种疫病混合感染造成鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)的临床及实验室诊断困难的问题,利用分离得到的GPV GDGZh1设计合成1对特异性引物GPV-rt PCRF/GPV-rt PCRR,建立了GPV SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法,并进行了临床样品及GPV在种鹅体内定植规律的检测.结果表明,该方法对质粒的检测灵敏度为3.5×10~2copies/μL,GPV具有组织广泛嗜性,种鹅的直肠、脾脏、心脏、肾脏和卵巢中病毒含量在攻毒后第5天最高,肝脏中病毒含量在攻毒后第9天最高,心脏和肾脏在攻毒后第17天检测不到病毒,直肠、肝脏、脾脏和卵巢在攻毒后第25天还能检测到病毒.这说明种鹅感染GPV后,病毒可以在其体内长期存在,并不断向外排毒,还能通过垂直传播的方式将病毒传递给雏鹅.     

HSP27在热应激致岭南黄鸡雏鸡免疫器官损伤中的作用

为了从热休克蛋白27(HSP27)基因角度揭示热应激致雏鸡免疫器官形态损伤的机制,试验将120只8日龄岭南黄鸡随机分为对照组和热应激组,并构建雏鸡热应激模型,采用组织切片和透射电镜方法对比分析其免疫器官在热应激条件下的显微结构和超微结构变化,并用Real-time PCR方法检测HSP27基因在免疫器官中mRNA的表达差异。结果表明:同日龄阶段比较,热应激组免疫器官发育不良,胸腺细胞数量减少,Hassall氏小体严重退化,胸腺细胞凋亡及坏死数量增多,染色质发生聚集,细胞器肿胀变性;脾脏组织疏松,脾小结生发中心不明显,动脉周围淋巴鞘变薄,淋巴细胞结构疏松,胞核内异染色质减少,线粒体数量增多、结构异常;法氏囊中淋巴滤泡数量减少,皮质和髓质分界模糊,淋巴细胞染色质聚集,胞浆中粗面内质网上核糖体脱落,线粒体肿胀空泡化。法氏囊中HSP27 mRNA相对表达量逐渐降低,在热应激第21天时相对表达量显著高于第28,35天;脾脏中HSP27 mRNA相对表达量逐渐升高,在第35天时相对表达量显著高于第21,28天;胸腺中HSP27mRNA相对表达量与日龄无明显关联,在第28天时相对表达量最低且显著低于第21天和第35天。说明热应激会造成岭南黄鸡雏鸡免疫器官损伤,而HSP27在这一过程中扮演着重要角色。