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为鉴定猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)NSP8蛋白的抗原表位,本研究对GST-NSP8重组蛋白进行了原核表达,并用纯化后的重组蛋白免疫6周龄BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾脏,采用常规杂交瘤细胞融合方法,经3次亚克隆后制备了1株稳定分泌抗NSP8蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株。分泌的单克隆抗体亚类鉴定其重链为IgG1型,轻链为κ链;杂交瘤细胞培养上清的效价为1∶3 200。Western blotting试验结果表明该单克隆抗体能识别原核及真核表达的NSP8重组蛋白。利用截短表达的方法对NSP8蛋白进行抗原表位的鉴定,初步确定了单克隆抗体针对的抗原表位序列为31SPQILKQLTKAFNIAKSDFEREASV55。本研究制备的单克隆抗体及对抗原表位的鉴定,为TGEV NSP8蛋白相关功能的研究奠定了基础。 相似文献
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采用单因素法对比乙醇浸提、微波提取、超声波提取以及组合工艺提取类黄酮素的效果,优化其工艺参数。然后,再将提取残渣分别进行碱化、醇化预处理,进行柠檬酸和季铵盐接枝改性,以Cu~(2+)和F~-作为模型离子,进行静态吸附和动力学试验。结果表明,三元组合工艺类黄酮素提取率在同等其他条件下比二元法提高了13.9%。优化后的提取条件如下:70%(V/V)乙醇溶液(浸提比1∶10)浸泡下,依次于40 kHz 200 W超声振荡9 min、400 W微波加热8 min、80℃加热回流3 h,可获得3.17mg/g提取率。25℃柠檬酸残渣改性吸附剂对Cu~(2+)的吸附等温线符合Langmuir模型G=G_0c/(A+c),G_0=0.99 mg/g,A=5.95mg/g。季铵盐残渣改性吸附剂对F~-的吸附等温线符合Freundlich模型G=ac~b,a=0.006 6,b=3.55。吸附动力学研究表明,阳离子的吸附饱和时间为10 min,阴离子的吸附饱和时间为5 min。这表明从胡柚皮中提取类黄酮素后,其残渣经化学改性后成为离子吸附剂在技术上具有可行性。 相似文献
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本文作者通过多年的工作经验,对建筑检测和管理中存在的问题进行了分析与判断;同时谈谈现阶段检测中存在的一些问题,以便引起工程技术人员的重视. 相似文献
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为研究A组猪轮状病毒(Po RV)非结构蛋白NSP5在MA-104细胞中的定位情况,本研究将NSP5蛋白基因克隆于表达载体p EGFP-C2中构建重组质粒p EGFP-NSP5,将其转染于MA-104细胞中进行NSP5瞬时表达,并于转染48 h后利用激光共聚焦显微镜分析NSP5表达蛋白在细胞中的定位情况。结果表明,表达蛋白在MA-104细胞中的线粒体、内质网、高尔基体中均有分布,主要定位于细胞质。本研究为进一步分析病毒的复制和致病机理提供依据。 相似文献
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为了更系统的研究病毒在猪肠道内侵入及致病的分子机制,本试验以猪小肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IEC)为模型,应用RNeasy Min Kit从猪IEC中提取细胞总RNA,反转录后,利用SMART技术合成双链cDNA(ds-cDNA),通过同源重组的方法构建猪IEC酵母双杂交cDNA文库。结果显示,文库的滴度为8.4×108 CFU/mL,插入的ds-cDNA片段大小为0.5~2.0 kb,平均长度约为1.1 kb,文库重组率为100%。此文库为筛选与猪腹泻病毒相互作用的宿主蛋白及进一步阐明病毒的致病机制奠定了基础,为研制有效的药物或疫苗提供了依据。 相似文献
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对三清山高海拔栎林中云斑白条天牛Batocera lineolata Chevrolat补充营养、产卵刻槽、排粪孔、羽化孔等危害情况进行调查。结果表明,云斑白条天牛成虫与幼虫的主要寄主均为小叶青冈和多脉青冈。成虫啃食1~2 a生的枝皮补充营养。同一受害植株,树干阳面受害重。受害树木胸径集中在14~31 cm范围内。虫害部位主要分布在树干4 m以下区域。统计分析表明小叶青冈受害株产卵刻槽数与胸径呈负线性相关,羽化孔、产卵刻槽高度与胸径呈正线性相关;幼虫活动区间(羽化孔与产卵刻槽的高度差)与胸径相关不显著。 相似文献
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为制备猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)NSP5蛋白的单抗隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究以原核表达并纯化的重组NSP5蛋白(r NSP5-GST)免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,通过间接ELISA方法筛出一株稳定分泌抗TGEV NSP5蛋白的MAb杂交瘤细胞株(5C3)。MAb亚类鉴定结果显示其抗体亚类为Ig G1/κ链。杂交瘤细胞培养上清液和腹水的效价分别为1∶6 400和1∶105。Western blot鉴定表明该MAb能够识别原核及真核表达的NSP5重组蛋白。利用肽扫描法鉴定显示,该MAb识别的抗原表位为286EFTPTEVIR QMYGVN300。本研究制备的MAb及其抗原表位的鉴定,为TGEV NSP5蛋白结构和功能的研究奠定了基础。 相似文献
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