基因克隆测序与原核表达

 根据GenBank中登录的犬瘟热病毒h基因序列设计一对引物，利用RT-PCR方法扩增出犬瘟热病毒弱毒疫苗株的h基因，将其插入到克隆载体pMD18-T中，经蓝白斑筛选及SalⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定挑出阳性克隆进行序列测定，序列分析结果表明，该基因与GenBank上标准代表毒株序列完全同源；与扬州分离株、长春分离株、新疆分离株、日本分离株D85755同源性分别为90.6%、91.3%、90.5%、91%；与Onderstepoort、Convac株、美国分离株98-2666-2同源性较高，分别为97.7%、97.2%、98.1%。再将其定向克隆于原核表达载体pET-32a(+)中，转化感受态E.coli BL21细胞，经IPTG诱导表达分子质量约64 ku的重组H蛋白。     

犬瘟热病毒h基因克隆测序与原核表达

根据GenBank中登录的犬瘟热病毒h基因序列设计一对引物,利用RT-PCR方法扩增出犬瘟热病毒弱毒疫苗株的h基因,将其插入到克隆载体pMD18-T中,经蓝白斑筛选及SalⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定挑出阳性克隆进行序列测定,序列分析结果表明,该基因与GenBank上标准代表毒株序列完全同源;与扬州分离株、长春分离株、新疆分离株、日本分离株D85755同源性分别为90.6%、91.3%、90.5%、91%;与Onderstepoort、Convac株、美国分离株98-2666-2同源性较高,分别为97.7%、97.2%、98.1%。再将其定向克隆于原核表达载体pET-32a(+)中,转化感受态E.coli BL21细胞,经IPTG诱导表达分子质量约64 ku的重组H蛋白。     

中国特色的进境动植物检疫后续监管体系研究

中国特色的进境动植物检疫后续监管体系是中国特色进出境动植物检验检疫工作体系的重要组成部分.随着经济全球化向纵深发展和我国扩大进口战略的逐步实施,土地密集型和资源性农产品的进口量将大幅攀升.进境动植物检疫后续监管工作必将在解决快速通关与有效把关方面起到更加重要的作用.结合当前我国进境动植物检验检疫的检疫实践,分析了进境检疫后续监管方面的现状,并就如何进一步完善有中国特色的进境动植物检疫后续监管体系提出了几点建议,以期对不断发展和完善我国的进境动植物检验检疫体系提供借鉴.     

貂源犬瘟热病毒f基因酵母表达载体的构建和鉴定

根据GenBank中登录的犬瘟热病毒f基因序列设计一对引物,利用RT-PCR方法扩增出水貂源犬瘟热病毒分离株的f基因,将其插入到克隆载体pMD18-T中,经EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切鉴定后纯化回收,与经同样的酶酶切消化后并纯化回收的载体pPICZaA连接并转化E.coliDH5α,在含Zeocin的低盐LB固体培养基上筛选阳性转化子,阳性克隆菌经PCR法鉴定、酶切分析和测序鉴定表明目的基因插入位置、方向和阅读框正确。证明pPICZaA-f酵母表达载体构建成功。