陆川猪DGAT2基因克隆、序列分析及表达水平研究

为了获得广西陆川猪二脂酰甘油酰基转移酶2(DGAT2)基因编码区(CDS)序列,并探讨该基因在陆川猪和杜长大猪肌肉中的表达水平差异,试验以陆川猪背最长肌组织总RNA为模板,克隆获得DGAT2基因CDS序列并利用生物软件进行序列分析,同时采用实时荧光定量PCR技术检测150日龄陆川猪和杜长大猪背最长肌中DGAT2基因的相对表达量。结果表明:陆川猪DGAT2基因CDS序列长度为1 086 bp,与GenBank中的野猪、虎鲸、双峰骆驼、羊驼、佛罗里达海牛、野驴、马和家猫的同源性分别为99. 8%、93. 1%、93. 0%、92. 9%、92. 1%、91. 8%、91. 7%和91. 5%;陆川猪与野猪的遗传距离最近;陆川猪DGAT2蛋白由361个氨基酸组成,其中亮氨酸含量最高,半胱氨酸含量最少,DGAT2蛋白具有较弱的疏水性;在DGAT2蛋白高级结构中,α-螺旋占比39. 34%,无规则卷曲占比43. 21%,延伸链占比17. 45%; 150日龄陆川猪背最长肌中DGAT2基因相对表达量极显著高于同日龄的杜长大猪(P0. 01)。说明DGAT2基因在猪肌肉脂肪沉积过程中发挥了一定作用,但其作用于肌内脂肪的沉积机制尚不明确,可将DGAT2基因作为开展陆川猪肌内脂肪沉积分子机制研究的主要候选基因之一。     

广西巴马小型猪CTGF基因真核表达载体构建 及其相关生物信息学分析

[目的]构建广西巴马小型猪结缔组织生长因子(CTGF)基因真核表达载体并鉴定其活性,为深入研究CT-GF在癌症发生中的作用及其分子机制提供参考,也为构建CTGF转基因广西巴马小型猪及研发基于CTGF的癌症基因治疗策略提供理论依据.[方法]利用RT-PCR从广西巴马小型猪肝脏组织中克隆CTGF基因,并将CTGF基因亚克隆到pDsRed-N1载体上,然后通过脂质体转染小鼠Hep3B细胞,转染48 h后于荧光显微镜下观察细胞是否表达红色荧光蛋白,同时利用在线生物信息学软件对其理化性质进行分析.[结果]成功克隆获得广西巴马小型猪CTGF基因编码区(CDS)序列,序列全长1050 bp,共编码349个氨基酸,与NCBI上已公布普通猪参考序列的同源性为99.5%,有5处碱基突变,且均为同义突变.将广西巴马小型猪CTGF基因亚克隆到pDsRed-N1载体上成功构建了阅读框架正确的广西巴马小型猪CTGF基因真核表达载体,转染小鼠Hep3B细胞48 h后有红色荧光蛋白表达.广西巴马小型猪CTGF蛋白具有较强的亲水性,其二级结构中α-螺旋、β-折叠、延伸链和无规则卷曲各占13.18%、5.73%、17.48%和63.61%.[结论]广西巴马小型猪CTGF基因在进化过程中的保守性非常稳定,通过构建的真核表达载体能转染小鼠Hep3B细胞并成功表达,可用于生产转基因广西巴马小型猪及研发与CTGF基因有关的疾病模型.     

广西巴马小型猪SP1基因克隆测序及其真核表达载体的构建

[目的]克隆广西巴马小型猪特异性蛋白1(SP1)基因,并构建其真核表达载体,为揭示其对猪生长发育的调控机理打下基础.[方法]利用RT-PCR从广西巴马小型猪背最长肌组织中扩增SP1基因,采用DNASTAR、TMHMM等分别进行基因生物信息学分析;以pEGFP-N1质粒构建真核表达载体pEGFP-N1-SP1并转染293T细胞,于转染48 h后在倒置荧光显微镜下观察并拍照.[结果]克隆获得的广西巴马小型猪SP1基因与GenBank中野猪(Sus scrofa)的参考序列(XM_005652569.3)一致,未发现碱基突变位点;其编码序列(CDS)全长2340 bp,编码779个氨基酸.广西巴马小型猪SP1蛋白不存在跨膜结构,也不存在信号肽,不属于分泌型蛋白;其二级结构中α-螺旋占17.84%,延伸链占21.31%,β-转角占9.76%,无规则卷曲占51.09%.构建的真核表达载体pEGFP-N1-SP1能成功转染至293T细胞中并表达出绿色荧光蛋白.[结论]广西巴马小型猪SP1基因CDS序列编码蛋白主要参与细胞内活动,而非外分泌型蛋白,以SP1基因构建的真核表达载体pEGFP-N1-SP1能转染293T细胞并成功表达,可直接用于后期SP1基因功能探索及干扰表达等研究.     

蓬莪术新品种‘川蓬1号’

蓬莪术‘川蓬1号’是经系统选育而成的新品种。主根茎卵圆形或纺锤形,平均单株4个,长3~8 cm,直径1.8~4.0 cm,侧生根茎圆柱状分枝;根细长,末端膨大成肉质纺锤形块根,平均单株25个,长1.6~3.8 cm,直径1.0~1.4 cm。根茎(干品)产量5 311.8 kg·hm-2,块根(干品)产量1 941.5kg·hm-2;根茎浸出物含量15.41%、挥发油含量2.82%;块根总姜黄素含量为0.0035%、吉马酮含量为0.0386%。适应性强,产量高,品质优,适宜在四川金马河流域栽培。     

异育银鲫“中科5号”鱼种养殖试验

<正>一、材料与方法1.池塘条件池塘在浦东大团潘峰水产养殖场,主养异育银鲫"中科5号"的池塘面积为5亩,呈长方形,水深1.5米,水源为养殖场外河水、配有一台3千瓦叶轮式增氧机。鱼苗放养前用生石灰带水清塘消毒,每亩用150千克,待10天毒性消失后于5月25日施有机肥,做到肥水下塘,2018年每亩用有机肥400千克。2.苗种投放2018年5月9日从安徽引进异育银鲫"中科5号"乌仔25万尾,通过暂养获得夏花鱼苗,鱼苗成活率为90%。     

浅析布尔津县草原退化的原因及对策

草地资源是布尔津县生态安全及畜牧业发展的重要物质基础。近年来受自然条件和人为破坏的影响,造成草场严重退化,生态环境逐渐恶化。布尔津县56%的天然草原已有不同程度的退化,其中22%的严重退化。大面积的草场退化直接影响着布尔津县的生态环境及牧民的生产活动与牧区的经济发展。本文主要通过分析布尔津县草原退化情况,找出退化的原因,提出相应的防治对策。     

鱼菜共生种养技术的探究与实践

鱼菜共生池塘养殖技术是针对目前传统的水产养殖技术的环境污染、水产品质量下降等问题,自主研发的池塘养殖技术。现以上海桂峰果蔬专业合作社的鱼菜共生系统建设为例,从鱼菜共生系统的建设目标、建设规模和工程设计3个方面,介绍了鱼菜共生系统建设方法;同时,从种养田块、共生鱼类、共生蔬菜的选择,共生蔬菜移栽和采收,鱼塘的日常管理等方面,对鱼菜共生种养技术进行了综合探究;此外,初步分析了应用鱼菜共生种养技术的经济效益、生态效益和社会效益。     

巴马香猪β-防御素-2基因克隆、序列分析及热应激条件下的表达研究

为了获得广西巴马香猪β-防御素-2(pBD-2)基因编码区序列(CDS),并研究热应激条件下pBD-2基因mRNA在巴马香猪不同组织中表达规律,试验从巴马香猪心脏、肝脏、肾脏、胰腺、肌肉、十二指肠、结肠中提取总RNA,利用基因克隆技术扩增pBD-2基因CDS,通过生物分析软件对扩增出的序列进行生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR技术检测正常条件和热应激条件下pBD-2基因的表达量。结果表明:试验成功克隆得到巴马香猪pBD-2基因CDS区,全长210 bp,与GenBank中登录的野猪pBD-2基因CDS的同源性达到100%;通过碱基同源性建立的系统进化树上巴马香猪与野猪的遗传距离最近,聚为一支。巴马香猪pBD-2氨基酸组成中亮氨酸含量最高,占氨基酸总数的17.4%,进一步分析发现pBD-2蛋白具有较强的疏水性。热应激条件下巴马香猪心脏、肝脏、十二指肠、结肠及肌肉中pBD-2基因的表达量极显著高于正常条件下(P0.01)。说明在热应激条件下,巴马香猪心脏、肝脏、十二指肠、结肠和肌肉中pBD-2基因表达量升高,这有利于增强猪机体的抗病能力。     

陆川猪Myf5基因克隆及其在背最长肌中发育性变化表达研究

为了获得广西陆川猪生肌调节因子(Myf5)基因编码区序列(CDS),并探讨该基因在陆川猪背最长肌中的发育性表达情况,试验以陆川猪背最长肌组织总RNA为模板,克隆获得Myf5基因CDS,运用生物信息学软件进行测序及分析,并利用实时荧光定量PCR技术检测30,150,180,240,300日龄陆川猪背最长肌中Myf5基因的相对表达量。结果表明:试验克隆得到的陆川猪Myf5基因CDS全长为768 bp;与GenBank上公布的香猪(KC456667.1)Myf5基因CDS的同源性为99.6%;陆川猪存在第205位点的C→A,导致亮氨酸突变为蛋氨酸;广西陆川猪与香猪的遗传距离最近,它们聚为同一支;陆川猪Myf5蛋白氨基酸组成中丝氨酸含量最高,占氨基酸总数的13.7%;Myf5蛋白具有较强的亲水性,其蛋白高级结构包含α-螺旋、延伸链和无规则卷曲;陆川猪背最长肌Myf5基因相对表达量表现为30日龄时最高,在30～240日龄呈下降趋势,240～300日龄呈上升趋势。     

陆川猪FTO基因的克隆及生物信息学分析

为了获得广西陆川猪肥胖相关基因(FTO)编码区序列(CDS),试验利用基因克隆技术,从陆川猪背最长肌组织中提取总RNA,扩增出FTO基因CDS,并运用Lasergene 7.0、ExPASy ProtParam、ExPASy ProtScale、NPS@在线蛋白分析系统和SWISS-MODEL在线分析预测系统等分析软件对扩增出的序列进行生物信息学分析。结果表明:通过克隆测序得到的陆川猪FTO基因CDS全长为1 518 bp,与GenBank中公布的乌金猪FTO基因CDS的同源性为99.9%,与苏钟猪FTO基因CDS的同源性为99.6%;陆川猪存在第1 050位点的C→G,碱基G为陆川猪所特有,导致天冬氨酸突变为谷氨酸;通过建立系统进化树发现,陆川猪与乌金猪的遗传距离最近,它们聚为一支;陆川猪FTO氨基酸组成中亮氨酸含量最高,占总氨基酸的比例为11.7%,FTO蛋白具有较强的亲水性;陆川猪FTO蛋白的二级、三级结构预测显示包含α-螺旋、无规则卷曲和延伸链。说明陆川猪FTO基因具有高度的保守性,今后在陆川猪脂肪沉积研究中, FTO基因可作为主要候选基因之一。