蛋壳形成过程中部分生殖激素及其受体基因变化规律的研究

为了解蛋鸡产蛋过程中相关激素和受体基因的变化规律,试验采用放射免疫技术(RIA)和荧光定量PCR技术对蛋壳形成过程中血清孕酮(P4)、雌二醇(E2)2种激素含量的动态变化和孕酮受体(PR)、雌激素受体(ERα)在输卵管子宫部的表达进行测定。结果表明:蛋进入子宫前1小时孕酮含量最高,与其他时间点相比差异极显著(P0.01),蛋进入子宫部后孕酮含量逐渐下降,直到产蛋后1小时孕酮含量开始上升;雌二醇含量在蛋进入输卵管子宫部15小时最高,蛋排出时最低,产蛋后1小时开始升高;蛋壳形成过程中PGRmRNA的变化趋势是下降-上升-下降,蛋进入输卵管子宫部15小时PGR表达量较蛋排出时有极显著提高(P0.01),之后PGR表达量开始下降;在蛋壳形成过程中ERα表达量呈先上升后下降的趋势,在蛋进入输卵管子宫部45分钟时ERα表达量最高,与蛋排出时、产蛋后1小时相比差异极显著(P0.01)。     

基于iTRAQ技术挖掘猪肾组织高原低氧适应性关键蛋白

旨在探究高原低氧环境下藏猪与大约克猪肾组织中低氧适应的差异表达蛋白（differentially expressed protein,DEPs）。本试验选择藏猪与大约克猪两个品种无亲缘关系的去势公猪,饲养于海拔3 000 m的高原,按自由采食方式饲养至180日龄,每个品种随机选择生长情况相近的 9头猪采集肾组织。利用同位素标记相对和绝对定量（isobaric tags for relative and absolute quantification,iTRAQ）技术对藏猪和大约克猪肾组织中蛋白差异表达情况进行分析,并对差异表达蛋白进行GO（Gene Ontology）功能注释及KEGG通路分析。结果发现,在两猪种肾脏组织中共获得4 370个蛋白质,以FC>1.2或<0.833,P<0.05为筛选条件共筛选出181个DEPs,其中在藏猪中上调的蛋白质有138个,下调的有43个。这些DEPs主要功能富集在HIF-1信号通路、PPAR信号通路、补体和凝血级联信号通路、氧化还原酶活性、碳代谢、血压调节、线粒体等与低氧适应相关的条目和通路上,进一步综合分析后共筛选出5个与低氧适应相关的重要DEPs（CD59、A2M、eNOS、CDKN1B和PGK1）。这些DEPs分别在维持血液动力学、调节能量代谢与生理环境稳态等方面的调节中起到重要作用,为进一步研究猪的高原低氧适应性提供一定理论依据。     

藏猪与大约克猪EDN1基因多态性与表达差异分析

为探究EDN1基因在猪脂肪沉积机制中所发挥的作用,本实验利用RT-qPCR技术对藏猪及大约克猪心脏、背脂及背最长肌组织中EDN1基因的mRNA表达量进行检测,并采用Sanger测序法对藏猪和大约克猪EDN1基因3'UTR和5'UTR区域进行了单核苷酸多态性(SNPs)筛选与基因分型.结果表明:在不同品种猪中,藏猪心脏组...     

BMP15对藏鸡等级卵泡颗粒细胞孕酮分泌的影响

为探究骨形态发生蛋白15(Bone Morphogenic Protein 15,BMP15)对体外培养的藏鸡等级卵泡颗粒细胞孕酮分泌的影响，研究体外分离、培养并鉴定藏鸡等级卵泡F1颗粒细胞后，用0、25、50、100 ng/mL四种不同浓度的BMP15蛋白单独处理或者联合25 ng/mL促卵泡素（FSH）处理细胞，72 h后采用ELISA法检测不同处理组细胞培养液中的孕酮含量。同时，采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测不同处理组细胞中孕酮合成关键基因StAR、CYP11A1和HSD3B1 mRNA相对表达量。结果显示：免疫组化法鉴定体外分离培养的藏鸡F1卵泡颗粒细胞卵泡刺激素受体（FSHR）抗体阳性率95%以上；BMP15单独处理细胞后，随着BMP15浓度的升高，孕酮分泌量呈下降的趋势，且100 ng/mL处理组的孕酮分泌量极显著低于其他组（P<0.01）;BMP15联合FSH处理细胞后，随着BMP15浓度的升高，孕酮分泌量呈现上升的趋势，其中100 ng/mL处理组的孕酮分泌量极显著高于其他组（P<0.01）；不同处理组细胞中孕酮合成关键基因StAR、CYP1...     

藏猪和大约克猪FBXO32基因多态性及表达差异分析

为明确FBXO32基因在高原藏猪与大约克猪肌肉中的表达差异性，选取这2个猪种作为试验动物，采用双脱氧测序技术对藏猪(33头)、大约克猪(32头)FBXO32基因的5′UTR启动子区进行单核苷酸多态性(SNPs)筛选，利用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术检测FBXO32基因在藏猪、大约克猪腿肌及背最长肌组织中mRNA的相对表达量。研究结果表明，在FBXO32基因的5′UTR启动子区筛选到了G-257A和A-556G这2个SNPs位点，且SNPs位点在2个猪种群体间的基因型频率有着显著性差异(P<0.05);通过转录因子预测，发现这2个SNPs位点与肌细胞的更新、分化和增殖相关，推测FBXO32基因的SNPs位点是调控肌肉生长的关键位点；藏猪腿肌、背最长肌组织中FBXO32基因的mRNA相对表达量都显著高于大约克猪(P<0.05),由此推测FBXO32基因可以负向调控肌肉生长，这可能是导致高原藏猪生长速度慢的主要原因之一。本研究结果为进一步探究FBXO32基因在猪肌肉生长相关的调控机制提供了必要的理论依据。     

藏猪和大约克猪FABP3基因多态性及差异表达分析

【目的】脂肪酸结合蛋白3(FABP3)参与长链脂肪酸的摄取及利用，在脂肪沉积中发挥重要作用。探究FABP3基因在藏猪和大约克猪间的基因多态性和表达差异可为藏猪品质改良提供分子机制参考。【方法】选取180日龄藏猪和大约克猪为研究对象，对两猪种FABP3基因5’侧翼区和CDS区进行单核苷酸多态性（SNPs）筛选，使用实时荧光定量检测FABP3基因在肝脏、背最长肌和背脂3个组织中的表达量。【结果】在FABP3基因5’侧翼区筛选到T-114C和C-635A等2个SNPs位点，且SNPs位点基因型频率在藏猪与大约克猪群体间均呈极显著差异（P <0.01）；经转录因子预测发现这2个SNPs位点与前脂肪细胞的更新、分化以及脂肪沉积相关，推测这两个多态性位点是参与调控FABP3基因表达的重要功能位点。FABP3基因在藏猪肝脏、背最长肌中的表达量极显著高于大约克猪（P<0.01），在背脂中的表达量显著高于大约克猪（P <0.05）。【结论】推测FABP3基因可能为调控藏猪脂肪代谢的重要候选基因，在藏猪脂肪沉积中呈正向调控作用。