雏鸡冷应激前后血清中差异蛋白质组学研究

本试验旨在比较分析雏鸡冷应激前后血清中蛋白质的表达差异,并对重点差异蛋白质进行鉴定。将30只雏鸡随机分为3组,分别为冷应激组、冷适应组和常温对照组,收集各组雏鸡的血液制备血清后进行双向凝胶电泳(2-DE),以获得血清蛋白质表达的2-DE图谱,对2-DE图谱进行差异分析(利用PDQuest 8.0软件),随后采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术对差异表达蛋白质进行鉴定,并利用蛋白质印迹(Western blot)方法进行验证。结果显示:通过2-DE对常温对照组、冷应激组和冷适应组雏鸡血清进行分析,得到了比较完整的差异蛋白质数据,共找到差异蛋白质点23个。采用MALDI-TOF-MS技术分析其中几个重复性好且较为明显的蛋白质点,成功鉴定出4个差异蛋白质,其中2个为果糖二磷酸醛缩酶C(ALDOC),是参与葡萄糖、能量代谢通路供能的相关蛋白;随后,对差异蛋白质ALDOC进行Western blot验证,所得结果与2-DE的结果相一致。结果表明,雏鸡冷应激前后血清中蛋白质的表达具有明显的差异,这些蛋白质的表达差异可能与冷应激有关。     

低温环境下禁食对小鼠自发运动及腓肠肌中PGC-lα、ERRα表达的影响

应用旷场试验测定不同时长4℃冷暴露下采食和禁食C57BL/6小鼠的自发运动,并结合骨骼肌中PGC-lα与ERRα表达水平,探讨低温环境下禁食对C57BL/6小鼠自发运动的影响。结果显示,低温环境下禁食对C57BL/6小鼠的自发运动并无显著性影响,但焦虑情绪12 h差异显著(P<0.05),探索行为8 h和12 h差异极显著(P<0.01);腓肠肌中PGC-1α表达在4,8 h时差异极显著(P<0.01),12 h差异显著(P<0.05);ERRα表达在4,6 h时差异极显著(P<0.01)。结果表明,低温环境下禁食对C57BL/6小鼠自发运动未出现明显影响,而对小鼠焦虑情绪、探索行为和腓肠肌中PGC-lα、ERRα表达存在不同程度的影响,相比于禁食而言,冷刺激对小鼠机体的影响更大。     

不同时长冷暴露下C2C12细胞中O-GlcNAc和IL-6表达的变化

冷暴露下骨骼肌中O-GlcNAc（O-linked β-N-acetylglucosamine）糖基化修饰水平显著升高，作为"应激感受器"调控细胞信号转导及基因转录等；而骨骼肌作为分泌器官通过收缩产生的肌源性IL-6具有免疫作用，更能够调节骨骼肌中糖、脂代谢。本试验旨在检测不同时长冷暴露下小鼠成肌细胞系C2C12中O-GlcNAc相关蛋白和IL-6表达变化，初步探究冷暴露下O-GlcNAc与IL-6之间的潜在联系。本试验通过体外培养小鼠成肌细胞系C2C12，并随机分为不做冷暴露处理的对照组（cold 0 h组，也称为control组，37℃±0.5℃）和冷暴露（32℃±0.5℃）3、6、9、12 h处理组，采用Western blot方法检测不同时长冷暴露下O-GlcNAc糖基化水平和OGT、OGA及IL-6表达水平。结果显示，与对照组相比，冷暴露3 h，OGT表达水平显著升高（P<0.05），冷暴露6 h，OGA表达水平显著升高（P<0.05）；冷暴露3 h，O-GlcNAc糖基化修饰水平和IL-6表达水平极显著升高（P<0.01）。不同时长冷暴露下，C2C12细胞中O-GlcNAc糖基化修饰水平及IL-6表达水平显著升高，并且，不同时长冷暴露下，O-GlcNAc糖基化修饰和IL-6表达变化趋势高度相似，提示冷暴露下O-GlcNAc糖基化修饰可能参与IL-6表达的调控。