布莱凯特黑牛CRTC1、CRTC3基因克隆测序及表达分析

为研究布莱凯特黑牛CRTC1、CRTC3基因序列和表达情况及其与生长发育的关系,本实验运用克隆测序方法检测CRTC1、CRTC3基因CDS区,并进行生物信息学分析;运用qRT-PCR技术检测不同组织和不同月龄的mRNA相对表达量;并用免疫组化技术对蛋白进行定位分析。结果显示:克隆测序获得的布莱凯特黑牛CRTC1、CRTC3基因CDS区分别为1773 bp和1725 bp,分别编码590、575个氨基酸;运用生物信息学分析后发现CRTC1、CRTC3结构稳定性差,为亲水性、偏酸性蛋白;进化树显示与牛、瘤牛、山羊和绵羊的同源性高(>80%),蛋白互作网络图显示CRTC1、CRTC3蛋白与FoxO基因家族、AMPK家族等基因相互作用强。qRT-PCR结果显示CRTC1、CRTC3基因分别在睾丸和脂肪中mRNA相对表达量最高(P<0.01),在肌肉组织中亦有表达。在肌肉组织中,CRTC1、CRTC3基因mRNA相对表达量随着年龄的增加逐渐降低;免疫组化显示CRTC1、CRTC3蛋白主要在肌肉组织的肌原纤维中表达。以上结果表明,CRTC1、CRTC3基因调控肌纤维生长发育,进而参与肌肉生长发育相关调节。     

碱地黑牛ELOVL2和ELOVL5基因的克隆测序及表达分析研究

超长链脂肪酸延长酶（Elongation of Very Long Chain Fatty Acids,ELOVLs）是合成脂肪酸过程中的关键酶,与脂类的合成以及脂肪酸的代谢密切相关。本实验旨在研究碱地黑牛ELOVL2、ELOVL5基因CDS区序列及其在机体各组织中的表达情况,探讨ELOVL2、ELOVL5基因理化性质及表达规律。通过克隆获得的碱地黑牛ELOVL2和ELOVL5基因CDS区分别为885、900 bp,编码294、299个氨基酸,均为疏水性蛋白;进化树显示碱地黑牛ELOVL2、ELOVL5基因与牛、山羊、绵羊同源性最高。α-螺旋和无规则卷曲是主要的二级结构,对二者三级结构及氨基酸序列进行对比,发现ELOVL2氨基酸序列中第234位的半胱氨酸等同于ELOVL5中第231位的色氨酸,ELOVL2 C234和ELOVL5等效位置的W231对底物结合的特异性有影响,若将ELOVL5 W231替换到ELOVL2中的等效位置,ELOVL2将DPA转化为24:5n-3的能力丧失。亚细胞定位结果显示ELOVL2、ELOVL5蛋白主要定位在内质网上,荧光定量PCR实验结果显示二者均在肝脏中...     

碱地黑牛FADS1基因克隆测序及表达分析

实验旨在研究碱地黑牛脂肪酸脱氢酶1基因（FADS1）CDS区序列和表达情况，并探讨FADS1基因理化性质及表达规律。本研究通过克隆测序构建FADS1的系统进化树并进行生物信息学分析，用免疫组化技术对FADS1蛋白进行定位分析，免疫印迹检测FADS1蛋白在实验组织的表达情况。生物信息学结果显示碱地黑牛FADS1 CDS区长1 083 bp，编码360个氨基酸。FADS1不存在信号肽。FADS1进化树显示碱地黑牛FADS1与牛的遗传距离较近（99.9%），与鸡的遗传距离较远（80.0%）。结构预测表明FADS1中α螺旋占48.61%,β折叠占3.61%，延长链占13.06%，无规则卷曲占34.72%,4个α螺旋构成四螺旋束并在螺旋肽段之间形成一个疏水性的空腔，整体呈中空的桶状。互作网络解析显示：FADS1与ACSL1、ACSL3、ELOVL2、ELOVL5、PTPLA、PTPLB、ACOX1、ACOX2、ACADM、FASN、TECR等蛋白互作，参与FADS1-ELOVL5-HSD17B12-ACADM-ACOX1、FADS1-FASN-ACADVL-ACOX2等脂肪酸合成、代谢、脂滴生成...     

苹果套袋栽培关键技术

<正>1树种及品种的选择要选择立地条件好,品种优良、树势强健、壮树上的下垂大果套袋。红富士系片红品种比条红的套袋效果好,全红果率可达95%以上。     

葡萄出土前后到套袋前的管理

葡萄从出土前后到套袋前,这一时期的技术要点包括夏季管理、土肥水管理及病虫害防治等.各个技术要点落实在位于否,决定着葡萄的生长状况、产量和品质.基于此,介绍葡萄从出土前后到套袋前的管理技术.     

布莱凯特黑牛PID1基因的多态性分析及原核表达

为提高布莱凯特黑牛肉质品质,参照NCBI公布的牛PID1基因mRNA序列设计引物,以117头布莱凯特黑牛为试验材料,提取其眼肌总RNA,通过RT-PCR对布莱凯特黑牛PID1基因cDNA进行克隆测序,对PID1基因的每个外显子进行SNP检测,并分析其多态性。结果显示:布莱凯特黑牛PID1基因cDNA全长2 561bp,包括1个612bp的完整开放阅读框,编码203个氨基酸;在第2外显子上存在2处变异位点,但仅1处位点的突变引起氨基酸序列变化,表明PID1基因在种内保守性较强。     

棚室桃树需防穿孔病

近年来,随着设施桃树栽培的发展,面积和产量都有了大幅度的提高,随之而来的是棚室桃树病虫害的发生也日趋严重,特别是桃树穿孔病在一些品种特别是油桃品种上严重发生,给有的棚室造成很大损失。     

苹果夏季管理技术

1谢花后疏果定果 疏果、定果原则是旺树多留,弱树少留。留果量根据枝果比、叶果比或距离留果,如富士一般生长枝和结果枝比为3～4∶1,壮树可适当多留,叶果比为30～40∶1,     

布莱凯特黑牛CB1基因克隆测序及表达分析

本试验旨在研究布莱凯特黑牛CB1基因CDS区序列和表达情况,探讨CB1基因与脂肪沉积的关系。运用RT-PCR技术克隆CB1基因CDS区序列,并进行生物学分析;运用qRT-PCR技术检测不同组织的mRNA相对表达量;以及运用免疫组化技术对蛋白进行定位分析,运用Western blot技术检测CB1蛋白在不同组织的表达量。结果显示,克隆获得的布莱凯特黑牛CB1基因CDS为1495 bp,编码477个氨基酸。进化树显示布莱凯特黑牛CB1基因与牛、山羊、绵羊同源性最高(>98%)。qRT-PCR结果显示CB1基因在不同组织均有表达,在脂肪组织中相对表达量最高;免疫组化显示CB1基因主要在脂肪细胞膜上表达;Western blot结果显示CB1蛋白在脂肪组织和肌肉组织均有表达,在脂肪组织表达量显著高于肌肉组织。综上推测,CB1基因参与脂质代谢相关调节过程,为肉牛肉质性状的分子选育提供参考。     

CRTC2基因在不同品种和月龄肉牛的表达分析

为了研究肉牛CREB转录激活因子2(CRTC2)基因在肌肉组织中不同品种和月龄的表达情况,探讨CRTC2基因与生长发育的关系,利用qRT-PCR技术检测CRTC2基因在不同组织和不同月龄的表达规律;运用Western blot和免疫组化方法对CRTC2蛋白进行定量定位分析,探讨CRTC2蛋白的表达规律。结果显示:布莱凯特黑牛胰脏中CRTC2基因mRNA的表达量极显著高于其他组织(P0.01),睾丸中CRTC2基因mRNA的表达量最低;CRTC2基因在不同时期随着月龄的增加表达量逐渐降低,其中2和6月龄mRNA表达量极显著高于10和18月龄(P0.01),18月龄表达量最低;4个月龄布莱凯特黑牛的CRTC2表达量均高于鲁西黄牛,且2和6月龄品种间差异极限著(P0.01);CRTC2蛋白随着月龄的增加呈现逐渐降低的趋势,其中2月龄表达量极显著高于其他月龄(P0.01),18月龄相对表达量最低;4个月龄布莱凯特黑牛蛋白表达量均极显著高于鲁西黄牛(P0.01)。提示:CRTC2基因主要在肌肉组织的肌原纤维中表达,可能参与动物的早期分化和生长相关过程,对调控肌肉生长发育发挥重要作用。