营养素对鱼类体色的影响

体色是影响鱼价格和价值的重要因子之一，影响鱼类体色的因素主要有遗传因素、神经内分泌系统、营养素以及养殖环境等因素。文章就营养素对鱼类体色影响作一简述。     

猪精子与慢病毒作用机制的探讨

在制备转基因动物的方法中,精子载体法(与质粒结合)因操作简单而备受关注,但整合效率低,遗传稳定性较差,而慢病毒载体具有良好的感染效率和整合效果,慢病毒与精子孵育制备转基因动物是转基因方法的有益尝试。本研究采用这一新方法成功制备出转基因猪。为了探索精子与慢病毒的相互作用机制,首先制备慢病毒,经梯度稀释法测定其滴度为1.2×105 ifu/mL。然后,用DNA酶消化去除慢病毒液中载体质粒,将慢病毒液与精子在17℃下共孵育2h后,再用RNA酶消化慢病毒颗粒,对精子进行RT-PCR、PCR和FISH检测。结果提示,慢病毒颗粒可能进入精子中。该发现为这一转基因新方法的建立提供了理论依据。     

中药"壮阳促孕散"对小白鼠传统致畸试验的研究

用昆明种小白鼠对中药“壮阳促孕散”进行传统致畸试验研究。在试验中，对所有孕鼠的着床数、活胎数、死胎数、吸收胎数、胎鼠体重、身长、尾长、颜色、形状、大小、数量以及胎鼠的内脏和骨骼进行了检查记录。结果表明：致畸反应呈阴性，这说明中药“壮阳促孕散”无致畸作用。     

硒对S. aureus诱导的奶牛乳腺上皮细胞Nod2/MAPK/mTORs信号通路关键蛋白表达的影响

【目的】硒（Se）能否通过Nod2/MAPK/mTOR途径调控金黄色葡萄球菌诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎性损伤,有待于进一步研究。因此本研究将探究硒对金黄色葡萄球菌（S. aureus）感染的奶牛乳腺上皮细胞（bMECs）Nod2/MAPK/mTORs信号通路中关键蛋白表达的影响,从而为阐明硒的免疫调控机制提供理论依据。【方法】首先将bMECs以10 ⁶细胞/孔接种于6孔板中,当细胞超过80%的汇合度时,用含2、4和8 μmol·L ^-1浓度硒的培养基替换原来的培养基,继续孵育12 h,然后用PBS洗涤每孔3次,将S. aureus按MOI=1:1的比例加入6孔板中,继续培养0.5 h,然后收集bMECs细胞进行相关蛋白的检测。本试验共分3大组,即对照（Con）组（bMECs）、模型（Mod）组（bMECs+S. aureus）和试验组。其中试验组又分3个亚剂量组,即Low组（bMECs+2 μmol·L ^-1 Se+S. aureus）、Mid组（bMECs+4 μmol·L ^-1 Se+S. aureus）和Hig组（bMECs+8 μmol·L ^-1 Se+S. aureus）,每组设3个重复。利用BCA蛋白测定试剂盒对收集的bMECs细胞进行总蛋白提取。应用Western blotting技术检测bMECs中Nod2和RIP2蛋白表达水平及JNK,AKT和mTOR蛋白磷酸化水平。将蛋白样品加到10%的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中,上样量为20 μg/孔,之后将蛋白转移到聚偏氟乙烯（PVDF）膜上。将PVDF膜用5 mL 5%脱脂乳阻断2 h,脱脂乳脱脂后用TBST清洗后,分别用5 mL的 Nod2、RIP2、JNK、AKT、mTOR和β-actin的一抗孵育过夜,回收一抗。之后在PVDF膜中分别加入5 mL上述蛋白的二抗,室温孵育2 h,回收二抗。PVDF用TBST洗涤5次,最后在暗室条件下进行化学显影。 【结果】S. aureus能显著提高bMECs中Nod2和RIP2蛋白表达水平及JNK,AKT和mTOR蛋白磷酸化水平（P<0.01）。S. aureus感染0.5 h后,Nod2蛋白水平显著升高（P<0.01）。在培养基里添加2 μmol·L ^-1 的硒可极显著抑制Nod2蛋白的表达（P<0.01）,在培养基里添加8 μmol·L ^-1 的硒可显著抑制Nod2的表达（P<0.05）; S . aureus感染0.5 h后,RIP2蛋白水平显著升高（P<0.05）,而在培养基里添加8 μmol·L ^-1 硒可显著抑制RIP2蛋白的表达（P<0.05）;S. aureus感染0.5 h后,与对照组相比,模型组JNK蛋白磷酸化水平显著升高（P<0.01）。在培养基里添加4 μmol·L ^-1 的硒能显著抑制JNK蛋白的磷酸化水平（P<0.05）,在培养基里添加8 μmol·L ^-1 的硒能显著抑制JNK蛋白的磷酸化水平（P<0.01）; S. aureus感染0.5 h后,与对照组相比,模型组AKT蛋白磷酸化水平显著升高（P<0.01）。在培养基里添加4 μmol·L ^-1 硒可极显著抑制JNK蛋白的磷酸化水平（P<0.01）,在培养基里添加8 μmol·L ^-1 硒可显著抑制AKT蛋白的磷酸化水平（P<0.05）;S. aureus感染0.5 h后,模型组mTOR蛋白磷酸化水平显著升高（P<0.01）。在培养基里分别添加4 μmol·L ^-1 和8 μmol·L ^-1 硒均能显著抑制mTOR蛋白磷酸化水平（P<0.05）。 【结论】硒可通过抑制bMECs Nod2/MAPK/mTORs信号通路中关键因子蛋白的表达而减轻S. aureus诱导的bMECs炎症反应。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒延边地方株GP4结构基因分析

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)易引起基因变异现象,使得异地疫苗不能有效控制本地区猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的发生.为研制适合本地区的亚单位疫苗,参照GenBank中已发表的PRRSV序列设计了1对特异性引物,对吉林省延边地区分离株YB-0605 GP4基因进行了序列扩增和测序,序列分析结果表明,PRRSV YB-0605株GP4氨基酸序列与CH-1α、HEB1株氨基酸序列高度一致,而与VR-2332、BJ-4株有一定差异,和LV株在N端及中心区具有很大差异,YB-0605株GP4蛋白抗原性及亲水性与河北省株具有较高相似性;与VR-2332株相比,GP4蛋白在第30 ～40位氨基酸处抗原表位形态发生较大变化,在第50位氨基酸处抗原表位优势增强现象.     

基于个性化发展的动物医学专业创新人才培养模式研究

个性化创新人才的培养是高等院校人才培养对社会需求多样化变化的回应,是高等院校人才培养模式改革的新趋势和新出路。笔者从个性化创新人才培养内涵入手,通过对传统人才培养模式的分析,结合动物医学专业特点,提出构建动物医学专业个性化创新人才培养模式的思路,探索个性化创新人才培养的途径,从而促进地方性高校动物医学专业人才培养质量的持续提高。     

miR-93对延边黄牛垂体细胞GH分泌的影响

为了分析血液外泌体miRNA对延边黄牛垂体细胞生长激素（GH）分泌的影响,试验选择在延边黄牛和韩延牛血液外泌体中存在显著差异表达的miR-93,分析其对延边黄牛垂体细胞GH分泌的影响机制。试验首先进行延边黄牛垂体细胞的原代培养,之后将miR-93的mimics（miR-93-mi组）、mimics对照品（NC对照组）、inhibitor（miR-93-in组）、inhibitor对照品（iNC组）转染给已建立的垂体原代细胞,48 h后收集细胞,提取总mRNA和总蛋白。试验利用targetscan和RNAhybrid分析软件对miR-93的靶基因进行预测,并利用双荧光素酶报告基因系统对miR-93的靶关系进行验证;利用实时荧光定量PCR和Western blotting技术分别检测靶基因mRNA转录和蛋白的表达情况,结果表明,miR-93靶向了生长激素释放激素受体（GHRHR）的3'UTR;与NC对照组比较,miR-93-mi组的延边黄牛垂体细胞中GH mRNA转录和蛋白表达均极显著低于NC对照组（P<0.01）;miR-93-mi组的GHRH mRNA转录和蛋白表达均极显著低于NC对照组（P<0.01）,而miR-93-in组的GHRHR蛋白表达显著高于iNC对照组（P<0.05）。说明miR-93可通过调节GHRHR的表达而调控延边黄牛垂体细胞GH的分泌,进而调控延边黄牛的生长发育。     

猪乳外胞体总miRNAUnit对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制抑制的研究

通过对猪乳汁Exosome中总miRNA进行分离提取,以验证其对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的抑制作用。首先提取猪乳汁中的Exosome,并将提取的Exosome对感染PRRSV的MARC-145细胞进行初步处理,于24、48 h后进行病毒滴度测定,并在MARC-145细胞上接种PRRSV病毒96 h后对细胞形态进行观察;随后对猪乳Exosome中的总miRNA进行进一步提取,用提取的总miRNA处理感染PRRSV的Marc-145细胞,于24、48 h后进行病毒滴度测定,同时也在MARC-145细胞上接种PRRSV病毒96 h后对细胞形态进行观察。结果表明,转染猪乳Exosome和转染猪乳Exosome总miRNA细胞中的PRRSV滴度都显著低于转染PBS(阴性对照);同时相对于阴性对照组,转染猪乳Exosome和转染猪乳Exosome总miRNA的细胞形态排列较紧密,边缘较清晰整齐。说明猪乳Exosome中存在与抑制PRRSV复制有密切关系的miRNA,本研究将为PRRS的预防和治疗提供新的理论依据和途径。     

黄曲霉毒素解毒酶在小鼠肠道中的特异性表达

通过筛选出黄曲霉素解毒酶(ADTZ)基因片段,采用鼠的黏蛋白启动子(MUC)成功构建了ADTZ基因肠道特异性表达载体(MUC-ADTZ-LV),并利用原核注射法制备了肠道特异性表达ADTZ转基因小鼠。PCR和Southern blot鉴定结果显示,成功制备了6只携带肠道特异性表达ADTZ基因转基因小鼠。RT-PCR结果显示,ADTZ基因仅在小鼠肠道中进行了特异性表达。肠液中ADTZ的活性为(4.62±1.54)U/mL。在饲料中添加黄曲霉毒素并对小鼠进行14d的喂养试验,之后对血清生化指标及小鼠血清和肝脏中黄曲霉毒素的残留进行了测定。结果表明,转基因组血清中总蛋白(TP)和球蛋白(GLP)的含量显著高于阳性对照组,而转基因组血清中的丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量显著低于阳性对照组(P0.05)。转基因组小鼠血清和肝脏中黄曲霉毒素的残留量显著低于阳性对照组小鼠血清和肝脏中黄曲霉毒素的残留量。本试验在转基因小鼠的肠道中成功生产了ADTZ,并降低了饲料中黄曲霉毒素对小鼠毒性的影响。     

贝尼尔聚乳酸微球制备条件的研究

采用单因素设计，利用溶剂挥发法以微球载药量为主要的优先水平，结合微球粒径大小筛选制备贝尼尔聚乳酸微球的最佳条件。结果，贝尼尔与聚乳酸的最适质量比为1：2，聚乳酸的体积分数为6．67％，超声波处理时间为30s，非溶剂系统为10g／L明胶缓冲液，二氯甲烷的挥发速度为0．05mL／min，干燥温度为室温(15～25℃)。