从内毒素激活效应细胞的分子机制谈抗内毒素药物的研究进展

脂多糖(Lps)是一类具有高度活性的大分子物质,可依赖LBP/CD14系统作用于细胞,特别是单核细胞、巨噬细胞和中性粒细胞(PMNS)等通过一系列胞内信号传导系统诱导细胞产生多种生物活性分子,如:TNF-α,白介素,前列腺素等,在革兰氏阴性菌感染的发病机制中扮演着十分重要的角色,其可激活损伤血管内皮细胞,引起机体产生局部炎症反应和弥散性血管内凝血(DIC)等病理反应,引起发热,呼吸窘迫综合症,心肺功能严重损害及多器官功能衰竭(MOF),甚至引发致死性休克,因此全面了解内毒素的作用机制,研究有效的内毒素拮抗剂,对预防和治疗内毒素(ET)性疾病有重要意义。     

抗狂犬病病毒ERA株单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

将狂犬病病毒ERA株纯化后免疫雌性BALB／c小鼠。取其脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞进行融合，经克隆和间接ELISA筛选，获得3株稳定分泌抗狂犬病病毒ERA株单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为c7、c4和H3。经过鉴定：其腹水效价分别为1：1×10^3、1：5×10^4及1：1×10^4；且与犬瘟热病毒（CDV）、犬细小病毒（CPV）、犬腺病毒（CAV）不发生交叉反应；3株单抗均为IgG类型。采用G蛋白亲和层析柱对腹水进行纯化，将纯化后的单抗腹水用FITC（异硫氰酸荧光素）标记制备荧光抗体，建立了检测狂犬病病毒的荧光染色法。结果表明，该方法对狂犬病的实验室诊断具有快速和特异性高的特点。     

胃蛋白酶和胰蛋白酶对大豆凝集素的稳定性研究

本研究以纯化的大豆凝集素(SBA)为研究对象,体外研究了动物体内两大主要蛋白消化酶即胃蛋白酶和胰蛋白酶对其酶解作用。试验通过SDS-PAGE方法分析了SBA经蛋白酶酶解后的降解程度;利用间接竞争ELISA方法测定其在酶解过程中的活性变化。结果表明:SBA可缓慢地被胃蛋白酶降解,SBA浓度越高,完全降解需要的时间越长;随着SBA的降解,SBA的活性也逐渐减小,随着酶解时间的延长活性消失速度也逐渐变慢,并且在本研究选取的酶浓度作用下,SBA浓度越高,活性减小的速度越快,但活性完全消失的时间延长。然而,SBA不能被胰蛋白酶降解,并且酶解过程中SBA的活性也保持完好,说明SBA对胰蛋白酶具有很好的稳定性。因本研究结果将为进一步揭示大豆凝集素在动物体内的消化动力学及其对机体的抗营养作用机理研究奠定理论基础。     

小鼠细胞因子实时定量PCR检测方法的建立及应用

采用荧光SYBR Green I建立小鼠细胞因子mRNA实时定量PCR的检测方法;并利用建立的实时定量PCR的检测方法时感染H5N1禽流感病毒的BALB/c小鼠不同时间采集的肺脏组织中几种重要致炎细胞因子及趋化因子mRNA表达水平进行了检测.对HSN1禽流感病毒感染的BALB/c小鼠肺脏细胞因子的检测具有高度的特异性,检测的灵敏度为10~1～10~2拷贝数.H5N1禽流感病毒感染BALB/c小鼠后,小鼠肺脏中IL-1β、IL-6、TNFα、MIG、IP-10、RANTES、MIF和HMGB1细胞因子mRNA表达水平与时照组小鼠相比均有明显差异.建立的实时定量PCR能在基因转录水平敏感和特异地反应细胞因子的表达水平,该技术在基础和临床免疫研究中,具有良好的应用价值.     

H5N1虎源流感病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及临床应用

根据本室分离获得的虎源H5N1流感病毒的HA基因序列测定结果,结合GenBank中报道的H5亚型禽流感病毒HA基因序列进行同源性比较分析,选择保守序列区作为扩增区域,利用Primer5·0引物设计软件和BLAST软件程序设计出特异性扩增引物。采用成本较低、不需要特异探针引物、优化周期短,能区分病毒变异株的SYBRGreenI随机掺入法建立定量PCR反应体系,并对反应条件进行优化。试验结果表明应用该方法对虎源H5流感病毒的检测具有高度的特异性,检测的灵敏度为101~102拷贝数。对20份病死老虎临床病料和24份人工感染的小鼠脏器病料用荧光定量RT-PCR方法、常规RT-PCR方法和病毒分离方法进行检测,荧光定量RT-PCR方法检测结果略高于常规RT-PCR方法,但与病毒分离方法结果相一致。这说明荧光定量RT-PCR方法可以对临床上H5N1虎源流感病毒检测提供参考。     

日粮补铬对早期断奶仔猪生产性能、血液理化和应激反应指标的影响

根据窝别、体重将 1 6头早期断奶的仔猪随机分为对照组和试验组 ,每组 8头 ,进行为期 35d的补铬试验。试验组每千克日粮中添加吡啶羧酸铬 2 0 0 μg。研究日粮补铬对早期断奶仔猪的生产性能指标、血液理化指标、应激反应指标的影响。结果 :①对照组仔猪血清中的铬在断奶后有明显的下降趋势 (P <0 0 5) ,日粮补铬可以极显著提高铬在血清中的浓度 (P <0 0 1 ) ;②可提高仔猪在断奶后 1 8d内的平均日增重 ;③可提高其血液中红细胞、血红蛋白和白细胞总数 (P <0 0 5) ;④可降低早期断奶仔猪血清中的皮质醇含量 (P <0 0 1 ) ,降低 1 8d、 2 7d和 35d时仔猪血清中的醛固酮含量 (P <0 0 1 ) ,此外补铬可提高早期断奶仔猪血清中的钾钠比值 (P <0 0 1 ) ;⑤可提高仔猪第 2 7天时血清总蛋白及球蛋白的浓度 (P <0 0 5)。     

犬蜱感染的防治

犬蜱又名壁虱或扁虱，俗称草爬子、狗豆子，为不全变态节肢动物。蜱的种类很多，在北京地区寄生于犬体表上的蜱常见有：羚头血蜱、长角血蜱、血红扇头蜱、二棘血蜱等，呈褐色或黑褐色，长卵圆形。前不久，某部犬场数十头犬发生蜱感染，经及时救治，已全部康复。现将防治结果与体会报告如下，供同行参考。     

H5亚型虎源流感病毒血凝素单抗制备及胶体金试纸条的研制

以H5N1亚型虎源流感病毒免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,用间接ELISA试验检测细胞培养上清,获得2株阳性杂交瘤细胞克隆株,命名为3A13和1B8.分别制备腹水后进行纯化,获得了抗H5亚型虎源流感病毒血凝素的单克隆抗体,用制备的单克隆抗体结合胶体金免疫层析技术,制备了H5亚型虎源流感病毒免疫胶体金快速诊断试纸条.该试纸条对H5N1虎源流感病毒鸡胚培养毒、H5亚型禽流感病毒标准抗原,以及24份虎疑似感染H5N1亚型虎源流感病毒感染病料和小鼠模型病料等检测结果为阳性,同时对H7和H9亚型禽流感病毒标准抗原及传染性支气管炎、新城疫抗原等检测结果为阴性;与HA-HI和RT-PCR的平行对比试验表明,试纸条检测敏感度与血凝试验和血凝抑制试验的敏感性相符.本试验所研制的免疫胶体金诊断试纸条可用于H5亚型虎源流感病毒的特异诊断和流行病学调查,为开发成品化检测试纸条奠定基础.     

人工喂养幼虎体内细小病毒的分离与序列分析

[目的]鉴定人工喂养幼虎的病原及其序列特征。[方法]应用FPV特异引物对8只哈尔滨虎园人工喂养幼虎的肺组织进行PCR检测,应用猫肾细胞（F81）细胞对PCR检测阳性样品进行病毒分离,并进行序列分析。[结果]从8份样品中均扩增到761bp的核酸片段。进而应用F81细胞从其中的1份样品中分离获得1株猫细小病毒。VP2序列分析表明,该病毒与此前在该虎园分离获得的虎源猫细小病毒同源性高达99.8%。[结论]猫细小病毒对未接受母乳喂养的幼虎威胁严重,应加强对人工喂养幼虎的被动免疫预防。