应用MIR测定牛奶中各种蛋白质含量的研究进展

测定牛奶中蛋白成分对于评估奶牛饲养管理水平、生理特征、遗传力和产品质量等具有非常重要的意义。奶牛生产性能测定(DHI)虽能测定牛奶中总蛋白含量,但不能测定各种蛋白成分。中红外光谱(MIR)是一种高效且经济的工具,二十年来,国外科研人员在对利用MIR预测牛奶中各种蛋白含量及其遗传力进行了许多研究,并取得了许多研究成果。现对从基于MIR预测方程的建立、影响预测方程准确性因素和预测方程应用三个方面进行总结,以期为进一步研究和应用提供借鉴。     

PGF2α信号对水牛卵母细胞和早期胚胎发育的影响

为探究前列腺素F_(2α)(PGF2α)信号对水牛繁殖能力的影响,利用免疫荧光染色和实时荧光定量PCR检测PGF_(2α)受体(PTGFR)在水牛卵母细胞和胚胎早期发育过程中的表达规律;并在卵母细胞体外成熟液、胚胎培养发育液中分别添加不同浓度的PTGFR抑制剂AL-8810,检测其对水牛卵母细胞成熟效率以及胚胎发育效率的影响。结果显示,PTGFR蛋白在水牛卵母细胞及胚胎中广泛分布,在4-16细胞期胚胎阶段,PTGFR基因表达水平显著高于未受精的卵母细胞和桑椹胚;AL-8810对水牛卵母细胞核成熟效率无显著影响,但高浓度处理组(1 600 nmol/L)显著降低卵母细胞早期凋亡率,100和800 nmol/L的AL-8810可显著提高体外16细胞期胚胎的发育效率,800 nmol/L组桑椹胚形成率最高。以上研究结果表明,抑制PGF_(2α)信号可有效提高水牛卵母细胞体外成熟质量与早期胚胎发育潜力。     

外源褪黑素处理方式对荷斯坦奶牛体内褪黑素富集与代谢的影响

为研究正常情况下经产荷斯坦奶牛24 h内血液中褪黑素浓度的变化情况,探索不同外源褪黑素处理方式对荷斯坦奶牛血液褪黑素浓度的影响,本研究采用颈静脉注射、颈部皮下注射、颈部皮下埋植和口腔灌服外源褪黑素等方式处理经产荷斯坦奶牛,观察血液中褪黑素浓度的变化情况并分析褪黑素在体内的分泌规律及代谢速率。结果显示,在24 h内,经产荷斯坦奶牛血液中褪黑素浓度变化明显,04：00浓度最高,为8.30 ng/mL,16：00浓度最低,为2.08 ng/mL。皮下埋植和口腔灌服外源褪黑素以后,血液中褪黑素浓度升高幅度较小;皮下注射46.4、4.64和0.464 mg褪黑素后,血液中褪黑素浓度迅速升高,1 h后达到峰值,分别为561.94、487.03、92.89 ng/mL,极显著高于注射前（P<0.01）;静脉注射46.4、4.64和0.464 mg褪黑素后,血液中褪黑素浓度迅速升高,0.5 h之后达到峰值,分别为767.68、639.19、110.56 ng/mL,极显著高于注射前（P<0.01）,高水平褪黑素可稳定持续48 h。本研究证明了荷斯坦奶牛体内褪黑素分泌有明显的昼夜节律性,静脉或皮下注射外源褪黑素可以迅速提高血液中褪黑素的浓度,且血液中褪黑素的代谢速度与褪黑素的浓度高度相关,随着血液中褪黑素浓度的增加,褪黑素的代谢速度明显加快。     

山羊卵巢褪黑素信号特异性载体pcDNA3.1-Pro/GDF9-ASMT与pcDNA3.1-Pro/Cyp17-MTNR1A/B的构建

本研究旨在构建褪黑素（melatonin，MLT）合成酶乙酰血清素甲基转移酶（acetylserotonin methytransferase，ASMT）的卵母细胞特异表达载体GDF9-ASMT和MLT受体（MTNR1A与MTNR1B）的颗粒（黄体）细胞特异表达载体Cyp17-MTNR1A、MTNR1B，以期为进一步生产高繁殖力转基因山羊提供载体材料。首先，分别扩增出山羊生长分化因子9（GDF9）与细胞色素P450家族17亚家族A成员1（Cyp17a1）启动子序列备用；然后，扩增ASMT、MTNR1A及MTNR1B基因CDS全长序列，并通过酶切将ASMT连接至GDF9启动子下游，将MTNR1A和MTNR1B连接至Cyp17a1启动子下游，制备出Pro/GDF9-ASMT、Pro/Cyp17-MTNR1A与Pro/Cyp17-MTNR1B表达元件；最后通过酶切连接将上述表达元件整合至pcDNA3.1（+）载体中，从而构建出pcDNA3.1-Pro/GDF9-ASMT、pcDNA3.1-Pro/Cyp17-MTNR1A和pcDNA3.1-Pro/Cyp17-MTNR1B真核表达载体。经测序验证，本研究扩增出的GDF9和Cyp17a1启动子长度分别为2 496和2 497 bp，与GenBank数据库中山羊GDF9和Cyp17a1基因起始密码子上游2 500 bp区域的同源性均为98%；扩增出的ASMT、MTNR1A与MTNR1B的CDS序列长度分别为1 037、1 100和1 130 bp，与GenBank所递交的标准序列同源性分别为98%、98%和99%，氨基酸序列同源性分别为97%、98%和99%。上述载体的成功构建可为进一步生产褪黑素高繁殖力转基因山羊提供参考。