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1.
为了制备草鱼重组TAB1蛋白(rCiTAB1)及其特异性抗体,首先以草鱼头肾组织c DNA为模板,PCR扩增Ci TAB1基因全长序列,并依次构建重组克隆质粒p MD19-T-Ci TAB1与重组表达质粒pET-32a-Ci TAB1。该重组表达质粒经0.5 mmol·L~(-1) IPTG,37℃诱导表达12 h后获得以包涵体形式表达的重组CiTAB1蛋白(rCiTAB1)。然后,采用3种不同方法对包涵体蛋白进行变性,发现与高浓度尿素直接变性法和洗涤后尿素变性法相比,洗涤后梯度尿素变性法处理后的蛋白纯度最好,经透析复性后得到浓度为2 mg·mL~(-1)的r Ci TAB1。最后,将rCiTAB1蛋白与白油佐剂及免疫增强剂混合,室温下混合1.5h乳化成免疫原,3次免疫新西兰大白兔制备兔抗CiTAB1抗体,经间接ELISA方法和免疫琼脂双向扩散试验测得免疫后第33天血清中特异性抗体的效价分别为1∶1 048 576和1∶16。Western blot检测到一条分子量约为72 kDa的特异性条带,表明该抗体能特异性识别r Ci TAB1蛋白。研究结果为后续深入研究CiTAB1蛋白功能提供了物质基础。 相似文献
2.
采用PCR方法从鱼源霍乱弧菌Y1株(Vibrio cholerae Y1)扩增毒素共调菌毛蛋白A(toxin-corcgulated pilin A,TcpA)基因并克隆至pMD 18-T载体.序列分析显示tcpA基因ORF长675 bp,编码224个氨基酸(GenBank登录号EU649677).同源性比对发现,该基因与GenBank中登录的7个霍乱弧菌参考株相应基因序列的核苷酸同源性和氨基酸同源性均很高,分别为99.6%~ 99.7%和98.7%~ 99.1%,表明TcpA蛋白相当保守.将tcpA基因亚克隆到表达载体pGEX-4T-1,并进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析发现分子量约为47.0 kD的重组TcpA融合蛋白主要以包涵体形式表达.Western blot检测结果显示,重组TcpA融合蛋白可与鼠抗Vc Y1菌株菌毛蛋白抗血清发生特异性结合反应.用纯化的重组TcpA融合蛋白免疫草鱼(Ctenopharyngodon idellus)制备抗血清,双相免疫扩散试验检测抗体效价达1:16,且该抗血清能够明显抑制Vc Y1菌株对HEp-2细胞的黏附.草鱼免疫后第25天用Vc Y1菌株攻毒,结果相对免疫保护率达到73.33%.研究结果表明,组TcpA蛋白仍保留着天然菌毛蛋白的免疫原性、免疫反应性和免疫保护性,重组TcpA蛋白可作为霍乱弧菌的候选诊断抗原和疫苗抗原. 相似文献
3.
草鱼细菌性败血症的诊断及流行病学调查 总被引:8,自引:0,他引:8
1998~ 1999年六安市万亩渔业基地的多种鱼类发生了细菌性疾病的流行 ,其中草鱼受损更为突出。为了研究起因 ,从根本上有效地防治此类疾病的流行 ,我们对该地区草鱼的疾病进行了诊断 ,并进行了有关流行病学的调查。1 诊断与调查方法1 1 1998年 6~ 10月和 1999年 5~ 7月 ,在六安市万亩渔业基地的精养鱼塘收集患病草鱼 ,现场观察 ,记录肉眼鉴别的症状 ,并将其用冰桶保存 ,带回实验室解剖观察后 ,对各器官进行显微检查 ;同时取症状基本一致的同批患病草鱼 (保持低温在 6h内 ) ,分离细菌。1 2 细菌的分离、培养 :无菌操作取呈弥漫性的… 相似文献
4.
拟态弧菌外膜蛋白OmpU 基因的原核表达及其免疫保护性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
自行构建的pMD18T-OmpU重组克隆质粒经BamHI/EcoRI双酶切后,定向插入原核表达质粒pGEX-4T-1中构建重组表达质粒pGEx-4T-1-OmpU.将重组表达质粒转化至大肠杆菌E.coli BL21进行IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE电泳及Western-blot分析显示,以包涵体形式表达的GST-OmpU融合蛋白的分子量约为62.9 kD,可与鼠抗拟态弧菌外膜蛋白(Omps)免疫血清发生特异性反应,提示重组OmpU保留了天然Omps的抗原性.用纯化的融合蛋白免疫昆明系小鼠,以50LD50拟态弧菌(5×103CFU/mL)攻击,小鼠的免疫保护率为60%(9/15).表明OmpU是拟态.弧菌的保护性抗原之一,具有研发成为外膜蛋白基因工程亚单位苗的潜在价值. 相似文献
5.
优质青贮饲料发酵的调控 总被引:2,自引:0,他引:2
优质青贮饲料发酵的调控安徽农业大学畜牧水产学院李槿年青贮饲料是新鲜作物经厌氧微生物发酵而使其营养物质得到保存的一种优质多汁饲料。已在畜牧业生产,尤其是养牛业中广泛应用。青贮饲料品质的好坏,直接影响其使用效果,成功地调制优质青贮饲料的关键在于促进有益微... 相似文献
6.
7.
8.
中华绒螯蟹养殖期间细菌性疾病流行情况调查研究 总被引:1,自引:0,他引:1
1999~2004年对安徽省巢湖市6个乡镇的池塘、稻田养殖的中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)的细菌性疾病流行情况进行了调查研究。结果表明:中华绒螯蟹细菌性疾病发生与流行存在着季节性,其发病率年平均依次为47.3%、59.6%、51.9%、46.7%、60.0%、29.9%,逐月比较发病率最大峰值出现在每年的8月份;感染率年平均分别为66.6%、75.8%、57.8%、52.0%、86.0%、39.3%,死亡率年平均依次为38.3%、44.6%、36.3%、29.6%、43.5%、21.6%;中华绒螯蟹细菌性疾病发病率与出现的最高气温、最低气温以及气温、水温持续偏高呈正相关(r=0.7657、r=0.7385、r=0.7237,P<0.01)。 相似文献
9.
正确使用及保存活菌制剂 总被引:6,自引:0,他引:6
活菌制剂是根据微生态学理论,以正常菌群为主体的有益微生物群研制而成的一类生物制剂.其主要作用为调整机体内正常菌群,增加抵抗力和免疫力,促进生长发育,其产品已用于防治人畜疾病,作为人的保健品或动物的饲料添加剂.目前市场上活菌制剂的种类很多,但实际使用的效果差异较大,原因除产品质量问题外,往往是由于使用或保存不当所致.因此,掌握活菌制剂的种类、待点、作用机制及其影响因素等知识十分重要.1 活菌制剂的种类活菌制剂的分类有多种.根据制剂的用途 相似文献
10.