大菱鲆源美人鱼发光杆菌杀鱼亚种的分离鉴定

从秦皇岛昌黎县某海水养殖场患病大菱鲆体内分离到1株细菌,经过生理生化特性和16SrDNA序列分析,鉴定为美人鱼发光杆菌杀鱼亚种,并命名Phdp QHD-1,在国内尚属首次。该菌在绵羊血平板上呈α溶血,利用PCR方法检测到Phdp QHD-1携带1种重要的溶血素hlyAch基因,与传统对杀鱼亚种无溶血素基因的特点不同。通过耐药性分析,确定了Phdp QHD-1对左氧氟沙星、头孢曲松钠、链霉素和氟苯尼考高度敏感,选取左氧氟沙星和头孢曲松钠进行联合用药,取得了良好的治疗效果。最后,攻毒试验显示大菱鲆死亡率高达85%,并从心血中分离到该菌,证明其为此次发病的病原菌。     

24味中草药对舌鳎源嗜水气单胞菌的体外抑菌效果

采用水提法提取诃子、知母等24味中草药的有效成分,用琼脂平板打孔法和试管二倍稀释法分别测定这些中草药对舌鳎嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila的抑菌圈和最小抑菌浓度(MIC),以筛选出体外抑菌效果较好的中草药。结果表明,诃子、夏枯草、青皮、苏木4种药物抑菌效果较好,其中诃子、夏枯草的抑菌效果最好,抑菌圈直径平均25mm以上,MIC为31.25mg/mL。本结果为开发中草药相关产品以及防治由嗜水气单胞菌引起的细菌性疾病提供了参考。     

黄芪和板蓝根超微粉的粒径观察及其抗鸡新城疫病毒效果

为探讨黄芪、板蓝根超微粉的抗病毒作用,应用激光粒度分析仪和扫描电镜观察了黄芪和板蓝根超微粉的粉体粒度及其破壁情况,通过鸡胚接种试验观察2种中草药超微粉对鸡新城疫病毒的抑制作用。结果表明:黄芪和板蓝根超微粉的粒度分布中心D_(50)分别为10.10μm和8.31μm;2种中草药超微粉的破壁情况良好,电镜下只能观察到不完整的细胞壁,为组织碎片。黄芪和板蓝根超微粉对新城疫病毒最小抑制剂量分别为1 562.5、781.2μg/m L,以板蓝根抗病毒效果较好。     

紫锥菊多糖对LPS损伤后IEC-6分泌TNF-αmRNA的影响

[目的]研究紫锥菊多糖(EPS)在内毒素(LPS)损伤小肠上皮细胞(IEC-6)时对肿瘤坏死因子(TNF)表达的影响,以探讨 EPS对损伤细胞的作用机制。[方法]采用 TRIzon试剂提取总RNA,RT-PCR扩增 TNF-α mRNA,琼脂糖凝胶电泳,并进行电泳及图像分析。[结果]50μg/ml EPS 可以部分抑制 LPS 刺激 IEC-6产生的TNF-α mRNA水平,而200、500μg/ml EPS随着浓度的增加,其抑制 TNF-α mRNA的水平逐渐增加;将 IEC-6分别用50、100、200及500μg/ml EPS预处理24 h,然后用10μg/ml LPS刺激达1、4 h,采用 RT-PCR方法分析得, LPS诱导 TNF-α mRNA表达被 EPS有效地抑制,4 h的抑制率高于1 h的抑制率。[结论]EPS通过抑制 LPS刺激细胞分泌 TNF-α mRNA的产生而起到肠道粘膜的保护作用,且 EPS对这种抑制作用具有浓度及时间依赖性。     

紫锥菊多糖对LPS损伤后IEC-6分泌IL-6mRNA的影响

[目的]探讨紫锥菊多糖(EPS)在内毒素(LPS)损伤后IEC-6分泌IL-6mRNA的影响.[方法]采用Trizon试剂提取总RNA,经RT-PCR扩增后,进行琼脂糖凝胶电泳及图像分析.[结果]当LPS刺激IEC-6细胞时,IL-6mRNA分泌增加.而EPS可以抑制这种作用,并且具有剂量依赖性,50 μg/ml EPS可以部分抑制LPS刺激IEC-6产生的IL-6水平,而100、500μg/mlEPS随着浓度的增加,其抑制IL-6的水平逐渐增加;将IEC-6用50、100、200、500 μg/ml EPS预处理24h,然后用LPS(10 μg/ml)刺激1、4h,采用RT-PCR方法分析得,LPS诱导IL-6mRNA表达被EPS抑制且具有时间依赖性.[结论]证实了LPS作用于小肠上皮细胞后,其分泌的细胞因子IL-6mRNA产生增多,而EPS可以抑制LPS刺激细胞分泌的IL-6mRNA的产生从而起到肠道粘膜的保护作用,并且这种抑制作用具有浓度及时间依赖性.     

减蛋综合征病毒AA-2株适应体外培养的研究

在分离并系统鉴定了减蛋综合症病毒AA-2株的基础上，进行了该毒株的体外培养试验，以寻求适应于细胞培养物中继代的细胞适应毒。结果表明，AA-2毒株可在鸭胚成纤维细胞（DEF）、鸭胚肾细胞（DEK）、鸭胚肝细胞（DEL）、鸡胚成纤维细胞（CEF）、鸡胚肾细胞（CEK）和鸡胚肝细胞（CEL）上增殖和继代，并随着继代次数的增加，CPE潜伏期缩短，持续期延长，半数细胞感染量（TCID50）呈逐代增加趋势，血凝效价（HA）逐代稳步增强，至第15代之后，之些变化趋于稳定。证明用鸭胚细胞培养的AA-2株病毒在PK-15，BHK-21，SP2/0等细胞中增殖的迹象。还较为系统的测定了第19代DEF毒的其它特性。发现在接毒后120小时，HA及TCID50值最高，细胞适应毒对鸭胚致死率为10%，比原毒降低23%，理化特性与原毒一致，且仍保持原毒的抗原性。     

半滑舌鳎源美人鱼发光杆菌美人鱼亚种的分离鉴定

2016年5月河北省秦皇岛市昌黎县某海水养殖基地半滑舌鳎突发大批死亡,为了确定引起死亡的病原菌,无菌采集心血进行病原菌分离鉴定,16S rDNA基因序列分析与GenBank中公布的美人鱼发光杆菌参考株序列同源性为99.6%,被鉴定为美人鱼发光杆菌;进一步通过生化特性分析,被确认为美人鱼发光杆菌美人鱼亚种。动物回归试验结果表明,其对舌鳎鱼具有很强的致病性,其LD_(50)为3.1×10~4CFU/mL,且对哺乳动物具有致病性。药敏试验结果显示,分离菌对诺氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星,乙酰甲喹高度敏感;对多西环素、阿米卡星中敏感;对庆大霉素、头孢曲松、替米考星等不敏感。