鲈鱼6-磷酸葡萄糖酶催化亚基(G6PC)cDNA和5’侧翼序列的克隆及分析

6-磷酸葡萄糖酶(glucose-6-phosphatase,G6Pase,EC 3.1.3.9)催化6-磷酸葡萄糖水解产生磷酸和葡萄糖,即糖异生途径和糖原分解途径的最后一个限速反应.我们用SMART RACE技术从鲈鱼(Lateolabraxjaponicus)肝脏中克隆了6-磷酸葡萄糖酶催化亚基(glucose-6-phosphatase catalytic subunit,G6PG)基因cDNA序列.该序列全长1651 bp,5’端非翻译区75 bp,3’端非翻译区496 bp,开放阅读框1080bp,可编码一个由359个氨基酸组成的蛋白,该蛋白理论分子量40.45kD、等电点9.30(GenBank登录号:HQ317736.1).氨基酸序列分析表明,鲈鱼G6PC与胡瓜鱼(Osmerus mordax)、翘嘴红鲌(Erythroculter ilishaeformis)、慈鲷(Haplochromis nub ilus)、斑马鱼(Danio rerio)、黑青斑河鲀(Tetraodon nigroviridis)、金头鲷(Sparus aurata)、非洲爪蟾(Xenopus laevis、牛(Bos taurus)、人(Homo sapiens)、小鼠(Mus musculus)及大鼠(Rattus norvegicus)11个物种的同源性达58％以上,其中与胡瓜鱼同源性最高,为85％.RT-PCR分析G6PC基因在鲈鱼肌、心、眼、脑、鳃、肝、肠、肾、脂和脾10个组织中的表达,在肝、肠和肾中有较高的表达,在脑和鳃只有微弱的表达.用基因组步移技术克隆了G6PC基因的5’侧翼区的序列1 243bp,表明该序列含有2个TATA box位点,2个胰岛素作用序列(insulin response sequence,IRS)及C/EBPb、CRE-BP、HNF-3b等潜在的转录因子结合位点.本研究结果表明,鲈鱼G6PC基因在肝、肠和肾中有高表达,其5’侧翼区存在多个转录因子结合位点,该结果为研究G6PC基因的表达调控机制提供了基础资料.     

鲈鱼视黄酸受体 α和视黄酸受体 γｃＤＮＡ克隆和基因表达分析

本文旨在研究鲈鱼视黄酸受体 α（ＲＡＲα）和视黄酸受体 γ（ＲＡＲγ）的结构及其基因的组织表达特点。采用反转录 ＰＣＲ和 ｃＤＮＡ末端快速克隆（ＲＡＣＥ）技术,从鲈鱼肝脏中克隆得到ＲＡＲα和 ＲＡＲγ全长 ｃＤＮＡ序列。检测鲈鱼肝脏、肌肉、心脏、眼、肠、肾脏、脂肪、脾脏、鳃和大脑 １０个组织中 ＲＡＲα和 ＲＡＲγ基因的表达情况。结果表明：１）鲈鱼 ＲＡＲαｃＤＮＡ全长２０９４ｂｐ,５′端和 ３′端的非翻译区分别为 １２４和 ６０８ｂｐ,开放阅读框为 １３６２ｂｐ,推测编码 ４５３个氨基酸,分子质量为 ５０．６４ｋｕ,理论等电点为 ８．２０。２）ＲＡＲγｃＤＮＡ全长 １６７１ｂｐ,其中包括 ３６ｂｐ的 ５′端非翻译区、１２９ｂｐ的 ３′端的非翻译区和 １５０６ｂｐ的开放阅读框,共编码 ５０１个氨基酸,分子质量为 ５６．２０ｋｕ,理论等电点为 ４．９６。３）鲈鱼 ＲＡＲα和 ＲＡＲγ都具有典型的核受体结构,两者氨基酸序列同源性高达 ６３．１％。鲈鱼的 ＲＡＲα和 ＲＡＲγ与红鳍东方有较高的同源性,分别为９６．９％和 ９５．２％。４）ＲＡＲα和 ＲＡＲγ基因在所有检测组织中均有表达,其中 ＲＡＲα基因在心脏和大脑中表达较少,在眼、鳃和肠中表达较高,而 ＲＡＲγ基因仅在鳃和脾脏中有较高表达。总之,本试验成功克隆了鲈鱼 ＲＡＲα和 ＲＡＲγ的全长 ｃＤＮＡ;鲈鱼 ＲＡＲα和 ＲＡＲγ有着典型的核受体结构,在各组织中广泛分布。     

鲈3种视黄醇类X受体基因cDNA的克隆和组织表达

视黄醇类X受体(retinoid X receptor,RXR)属于配体激活的核受体家族,在调节细胞内各种信号途径中起重要作用.采用RT-PCR和RACE技术,分离到鲈RXR基因3种亚型RXRα、RXRβ和RXRγ的cDNA序列.结果表明,得到的RXRα是长度为1 686 bp 3′末端不完整的cDNA序列,其中包括364 bp的5′非翻译区和1 322 bp的编码序列,可编码440个氨基酸.RXRβ cDNA全长为1 741 bp,其中包括150 bp的5′非翻译区,256 bp的3 ′非翻译区和1 335 bp的开放阅读框,共编码444个氨基酸,理论分子量为49.5 ku.RXRγ cDNA全长为1 847 bp,其中5′非翻译区为88 bp,3 ′非翻译区为397 bp,开放阅读框为1 362 bp,共编码453个氨基酸,分子量约为49.9 ku.氨基酸序列分析显示,鲈RXRα、RXRβ和RXRγ和其它物种的RXRs结构类似,在DNA结合区有P box和D box结构,配体结合区包括12个α螺旋和2个β折叠结构,H12的C端含有AF-2的激活区.系统进化树分析表明,鲈RXRα、RXRβ和RXRγ分别与其他动物的相应亚型聚类.组织分布特异性研究表明,鲈RXRα在肌肉、心脏、眼、大脑、肠、肾脏、脂肪、脾脏、鳃和肝脏10种组织中均有表达,但表达量较低；RXRβ在这10组织中都有较高表达,但心脏中表达量较低；在所检测的10种组织中,RXRγ都有表达,在肌肉、肠、肾脏、脂肪和脾脏表达量较高.