农杆菌介导转化油菜中几种影响玻璃化频率的因素

在用农杆菌介导法转化甘蓝型油菜的组织培养过程中,常会伴生着试管苗玻璃化现象的发生,此现象的发生会降低转基因的频率.本试验结果表明,影响玻璃化发生的因素较多,包括激素体积质量分数、蔗糖体积质量分数、琼脂体积质量分数和接种密度等.其中,激素6-BA和ZT体积质量分数对诱芽率和玻璃化率都有显著影响,随着体积质量分数的升高,玻璃化率升高,以6-BA体积质量分数为1mg/L,ZT体积质量分数为2mg/L时结果较为理想.蔗糖体积质量分数和琼脂体积质量分数对玻璃化率也有显著影响,当二者体积质量分数升高,玻璃化率降低,同时诱芽率也降低.综合分析,当蔗糖体积质量分数为50g/L,琼脂体积质量分数为10g/L时最适宜.接种密度对玻璃化的发生有显著影响,密度越高,玻璃化倾向越严重,而密度对诱芽率影响不明显.试验结果分析发现,接种密度为20～30个/皿最适宜.     

鸡新城疫的病因与诊断及防制措施

<正>鸡新城疫(ND)俗称鸡瘟,是由新城疫病毒引起鸡的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病,临床上以高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征,具有很高的发病率和病死率,常给养殖场户的造成较大经济损失。OIE将其列为A类法定报告疫病。我国《动物防疫法》将其列为一类动物疫病,《国家中长期动物疫病防治规划(2012—2020年)》将新城疫列为16种优先防治的国内动物疫病之一。笔者就鸡新城疫的诊断及防制措     

pFGC5941的改造及芸薹属透明种皮1基因(TT1)家族RNA干扰载体构建

pFGC5941是使用较多的植物RNA干扰载体,但其间隔区过长,间隔区与启动子间可用酶切位点偏少.本研究采用基于甘蓝型油菜(Brassica napus)PAP2基因第2内含子(BnPAP2I2)的新型间隔区取代了pFGC5941的原有PhChsA间隔区,并在新间隔区与启动子之间的多克隆位点处新增了一个AatⅡ切点,改进后的载体取名为pFGC5941M.克隆了芸薹属透明种皮1(TT1)基因家族RNA干扰片段BTT1Ⅰ,将其反义片段和正义片段采用Nco Ⅰ+AatⅡ和BamHⅠ+XbaⅠ分别插入到pFGC5941M的启动子与间隔区、间隔区与终止子之间,形成重组载体pFGrC5941M-BTT1Ⅰ(简称pBTT1 Ⅰ),复合PCR鉴定表明载体构建成功,转化根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404后获得工程菌株.pBTT1Ⅰ的构建有助于揭示芸薹属种皮发育和种皮色素积累的机理和探索黄籽性状分子育种.     

甘蓝型油菜单倍体遗传转化优化试验

以甘蓝型油菜单倍体试管苗或花粉胚状体作为试验材料进行遗传转化。结果表明,花粉胚状体在液体培养基加入2,4-D1.0mg·L-1预培养6d,得到的绿色愈伤率最高;甘蓝型油菜花粉植株PCK121茎段在预培养基(6-BA0.5mg·L-1+2,4-D2.0mg·L-1)上预培养后得到的绿色抗性愈伤率最高;油菜单倍体试管苗叶柄和茎段在预培养时间0～10d后转化均可产生抗性愈伤;在培养基中添加2,4-D时,很容易产生绿色抗性愈伤,这是因为此时培养物对卡那霉素的耐受性增加。