温度和盐度对中间球海胆胚胎发育早期进程联合效应

为探讨高温和低盐对中间球海胆(Strongylocentrotus intermedius)早期胚胎发育进程的影响, 本研究利用中心复合设计(CCD)和响应曲面分析法(RSM), 开展不同温度(12~26 ℃)和盐度(22~34)对中间球海胆胚胎发育早期进程的联合效应研究, 旨在建立温度和盐度对中间球海胆胚胎发育进程的定量关系模型, 并通过统计优化方法得出温度和盐度的最佳组合。结果显示, 在实验设定的温度和盐度范围内, 随着温度的升高, 中间球海胆早期胚胎发育时间呈现出先缩短后延长的趋势; 随着盐度的降低, 中间球海胆胚胎发育早期时间延长。温度的一次效应、二次效应和盐度的一次效应均显著影响(P<0.05)中间球海胆胚胎发育早期进程; 温度一次项系数的绝对值均大于盐度的一次项系数; 温盐的联合效应对中间球海胆胚胎发育早期进程的影响不显著(P>0.05)。实验建立的 2 细胞期、8 细胞期、16 细胞期、囊胚期、上浮期和四腕幼虫期发育进程模型方程决定系数分别为 0.9576、0.9508、0.9689、0.9932、 0.9681 和 0.9763。模型优化和验证试验得出, 温度 20.47 ℃和盐度 31.46 时, 中间球海胆 2 细胞期、8 细胞期、16 细胞期、囊胚期、上浮期、四腕幼虫期的发育时间最短, 分别为 1.28 h、2.07 h、3.31 h、4.14 h、11.28 h 和 47.31 h。 研究结果表明高温和低盐会延长中间球海胆早期胚胎发育时间。     

饥饿及再投喂对牙鲆幼鱼氮、磷排泄的影响

采用静水试验法,在水温为（15.0±1.0）℃下,研究了饥饿及再投喂对牙鲆Paralichthys olivaceus幼鱼（体质量为69.56 g±2.35 g）氨氮、活性磷排泄率的影响。结果表明：饥饿初期牙鲆氨氮、活性磷排泄率呈直线下降,随着饥饿时间的延长排泄率处于相对稳定状态;再投喂后,各饥饿处理组牙鲆氨氮、活性磷排泄率快速恢复到对照组水平,摄食对牙鲆氨氮、活性磷排泄率的影响显著（P〈0.05）。在饥饿和饱食状态下,牙鲆氨氮、活性磷排泄率的峰值均出现在10：00,为摄食后4 h,以后逐渐下降;低谷均出现在18：00;再投喂期间平均氨氮排泄率昼夜差异不显著（P〉0.05）,活性磷排泄率白天略高于夜间（P〈0.05）。     

不同海域刺参氨基酸的比较分析

采用生化手段,对大连海域的皮口、獐子岛、长海和瓦房店,山东的崂山、乳山、莱州和担子岛等八个海区刺参的体壁氨基酸含量和组成进行了测定和分析。结果表明:每个海域的刺参均含有16种氨基酸。氨基酸总量为45.7%~54.8%;每个海域的刺参均含有8种必需氨基酸,占氨基酸总含量的22.9%~26.5%;含有6种呈味氨基酸,占总氨基酸含量的56.0%以上。聚类分析发现各海域间刺参体壁氨基酸含量存在显著差异:天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸和谷氨酸等。     

不同季节刺参养殖池塘沉积物菌群结构及其影响因素

本研究以辽宁省营口地区刺参(Apostichopus japonicus)养殖池塘为研究对象,利用高通量测序技术,构建不同季节刺参养殖池塘沉积物菌群16S rRNA基因测序文库,解析刺参养殖池塘沉积物菌群的季节性差异和共性,查明影响沉积物菌群构成的主导环境因子。结果显示,营口地区刺参养殖池塘沉积物菌群的丰度和多样性以夏季最高,春秋次之,冬季最低。不同季节刺参养殖池塘沉积物差异菌群呈显著性季节演替特征(P<0.05)。其中,春季差异菌群主要隶属于拟杆菌门(Bacteroides),夏季差异菌群主要隶属于酸杆菌门(Acidobacteria)、疣微菌门(Verrucomicrobia)和浮霉菌门(Planctomycetes),秋季差异菌群主要隶属于厚壁菌门(Firmicutes),冬季差异菌群主要隶属于放线菌门(Actinobacteria)。尽管不同季节沉积物细菌组分比例不同,但第一优势菌门均隶属于变形菌门(Proteobacteria)(相对丰度>43.19%)。环境因子中,影响刺参养殖池塘沉积物菌群的主导环境因子为温度、总有机碳、总氮和pH。本研究将为刺参养殖池塘微生态调控提供理论参考。     

香螺线粒体COXⅠ和CYTB基因遗传多样性研究

为探明香螺Neptunea cumingii遗传多样性水平及其种质资源背景,采用分子生物学技术对中国黄、渤海海域6个不同地理群体香螺COXⅠ和CYTB基因的遗传多样性进行比较分析.结果表明:COXⅠ基因序列长度为1536 bp,多态性位点141个,共定义COXⅠ单倍型11个,大连市大连湾群体(DL)的单倍型COXⅠ-10变异位点数最多(115个),群体内遗传多样性分析显示,大连湾群体的平均核苷酸差异数(K)和遗传多样性指数(Pi)最高,分别为31.133和0.02121,群体间比较结果显示,烟台市八角港群体(YT)与蓬莱市长岛群体(PL)间的K值最低(2.094),大连湾群体与大连市旅顺盐场群体(LS)间的K值最高(24.971);CYTB基因序列全长为1140 bp,多态性位点34个,共定义单倍型14种,群体内遗传多样性分析显示,大连市獐子岛群体(ZZ)和大连市旅顺盐场群体的K和Pi值最高,分别为13.444和0.01236,群体间比较结果显示,烟台市八角港群体与蓬莱市长岛群体间K值最低(1.395),大连湾群体与旅顺盐场群体间的K值最高(11.497);聚类分析结果显示,6个不同群体香螺的线粒体COXⅠ和CYTB基因有显著性差异,分子方差分析(AMOVA)显示,群体内变异远大于群体间差异.研究表明,不同海域香螺未出现明显的群体间差异,且群体内变异远大于群体间差异,不同海域间香螺未达到亚种分化.     

不同高温水平下虾夷扇贝鳃的显微观察

实验室内营造了20℃、22℃、24℃及26℃四个不同高温水平处理组,将在15℃(对照组)暂养的虾夷扇贝(Mizuhopecten yessoensis)分别驯化到相应温度下(升温幅度1℃/d),并饲养7 d。然后采用组织学方法研究了不同高温水平下虾夷扇贝鳃的组织结构变化特征。结果显示,15℃时鳃小瓣厚度显著高于20℃、22℃、24℃和26℃下的鳃小瓣厚度,且在同一温度下,虾夷扇贝的鳃小瓣外鳃的厚度显著高于内鳃。15℃时虾夷扇贝鳃丝的宽度最大,为40.41μm,显著高于20℃、22℃、26℃时鳃丝宽度(P0.05),另外,20℃和22处理组,虾夷扇贝鳃丝宽度差异不显著(P0.05)。15℃时虾夷扇贝丝间隔宽度最大,为36.39μm,显著高于22℃、26℃时丝间隔宽度(P0.01)。24℃时,鳃小腔与鳃间隔扩张明显。由此可见,高温对虾夷扇贝鳃的组织结构影响显著。     

冻融期刺参养殖池塘沉积物菌群结构特征及其影响因素

本研究以我国北方典型岸基半开放刺参(Apostichopus japonicus)养殖池塘为对象,利用高通量测序技术构建冻融期刺参养殖池塘沉积物菌群16S rRNA基因测序文库,解析封冰期、融冰期和化冰期刺参养殖池塘沉积物菌群结构特征,并查明影响菌群结构的主导环境因子。结果显示,冻融期刺参养殖池塘沉积物菌群丰度和多样性表现为整体下调趋势,在融冰初期呈现显著性波动(P<0.05)。冻融期刺参养殖池塘沉积物菌群结构呈现显著性差异,封冰期、融冰期和化冰期差异菌群分别隶属于厚壁菌门(Firmicutes)、酸杆菌门(Acidobacteria)和软壁菌门(Tenericutes)。尽管不同阶段微生物相对丰度比例不同,但第一优势菌门均隶属于变形菌门(Proteobacteria),相对丰度高于49.04%;次优势菌门则呈现出显著性变化,其中,封冰期为拟杆菌门(Bacteroidetes),融冰期为绿弯菌门(Chloroflexi)和放线菌门(Actinobacteria),化冰期为浮霉菌门(Planctomycetes)。环境因子与菌群相关性分析表明,冻融期刺参养殖池塘沉积物菌群结构与环境因子具有显著相关性(P<0.05),温度、盐度、总氮和总有机碳是沉积物菌群的主导环境因子。本研究将为刺参养殖池塘精细化管理提供理论依据。     

不同季节刺参养殖池塘水体菌群结构与功能特征研究

为解析不同季节刺参(Apostichopus japonicus)养殖池塘水体菌群结构与功能特征，本研究选取中国北方典型岸基半开放刺参养殖池塘为研究对象，利用高通量测序技术和生物信息学分析手段，分别构建了辽宁长海刺参养殖池塘四季水体菌群16S rRNA基因测序文库。结果显示，辽宁长海刺参养殖池塘水体菌群丰度和多样性以夏季最高，秋季最低。不同季节第一优势菌门均为变形菌门(Proteobacteria)，次优势菌门为拟杆菌门(Bacteroidetes)。春、夏、冬季特异性菌门分别隶属于疣微菌门(Verrucomicrobia)、放线菌门(Actinobacteria)和厚壁菌门(Firmicutes)；秋季与其他季节相比，无显著性差异菌门(P>0.05)。基于COGs数据库预测，水体菌群24种功能蛋白存在显著性差异(P<0.05)。其中，春、冬季均表现为功能蛋白显著上调，主要表现在能量生产与转换、核苷酸运输与代谢、碳水化合物运输与代谢、次生代谢物的生物合成、运输与分解代谢、细胞壁/膜/包膜生物发生、细胞的能动性、转录和复制等方面；夏季水体菌群在碳水化合物运输和代谢功能、翻译、核糖体结构、生物发生功能、细胞壁/膜/包膜生物方面的功能蛋白显著性下调；秋季水体菌群在细胞周期控制、细胞分裂、染色体分裂、细胞骨架、次生代谢物的生物合成、转运和分解功能蛋白显著下调，细胞外结构功能蛋白显著上调。研究表明，刺参养殖池塘水体菌群种类及丰度存在季节性差异，秋季与其他季节相比，共有菌群种类较少，相似性较低；而水体菌群结构的季节性演替则依赖于其功能的变化。研究结果以期为刺参养殖池塘水体微生态调控提供一定的理论依据。     

北方吊笼养殖刺参肠道及其养殖环境菌群结构特征及其相关性分析

为探究北方吊笼养殖刺参(Apostichopus japonicus)肠道及其养殖环境菌群结构的关系，本研究基于高通量测序技术全面解析刺参肠道和养殖环境菌群结构和功能特征，并初步探讨刺参肠道及其养殖环境菌群相关性。结果显示，刺参肠道菌群丰度和多样性均显著高于养殖水体(P<0.05)。刺参肠道及养殖水体主要优势菌门均隶属于变形菌门(Proteobacteria)和拟杆菌门(Bacteroidetes)，二者存在13个相对丰度大于0.1%的共有核心菌属。此外，肠道菌群具有一定的独立性，其特异性菌群主要隶属于厚壁菌门(Firmicutes)和绿弯菌门(Chloroflexi)，以芽孢杆菌属(Bacillus)、乳酸杆菌属(Lactobacillus)、海泥海球菌属(Halioglobus)、Lutimonas和Woeseia为代表。基于KEGG代谢通路数据库，共注释到300条三级代谢通路，其中146条存在极显著差异(P<0.001)。刺参肠道菌群差异代谢通路主要表现在代谢方面，具体表现为碳水化合物消化吸收、蛋白质消化吸收和鞘脂类代谢。研究表明，刺参肠道菌群种类与其养殖水体呈高度相似性，但相对丰度存在显著性差异。本研究结果可为北方刺参吊笼健康养殖提供一定的理论依据。