致对虾肝胰腺坏死病副溶血弧菌荧光定量PCR检测方法的建立

【目的】建立一种对虾急性肝胰腺坏死病（Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease）病原菌副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus, VpAHPND）荧光定量 PCR 检测方法,对该病进行快速检测。【方法】根据副溶血弧菌基因保守序列设计特异性引物和探针,经优化反应体系及条件,建立检测 VpAHPND 的荧光定量 PCR 方法;以重组质粒为标准品制作标准曲线,并进行特异性、敏感性、重复性及临床应用试验。【结果】该方法定量范围宽,起始模板浓度范围为 2.3×101 ~2.3×107 拷贝 /μL 时,标准曲线具有良好的线性关系;最低检测限为 2.3 拷贝/μL,与对虾其他病原菌及病毒无交叉反应,重复试验变异系数为 0.45%~0.69%,可在 1 h 内完成样品检测;对临床对虾样品的检测结果表明,该方法与世界动物卫生组织（OIE）推荐的套式 PCR 法检测结果一致。【结论】应用 TaqMan 探针建立的检测 VpAHPND 的荧光定量 PCR 方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好的特点,可有效用于临床对虾样品的 VpAHPND 检测。     

进口奶粉的霉菌检测及鉴定

对进口奶粉中霉菌进行了检测及鉴定,结果表明:20个批次共100罐奶粉中,有80罐进口奶粉的霉菌计数均<10 CFU/g,有20罐进口奶粉的霉菌计数≥10 CFU/g;同时霉菌计数结果为10~50 CFU/g的有13罐,霉菌计数结果在50 CFU/g以上的有7罐,其中霉菌计数结果在100 CFU/g以上的有4罐。对4罐霉菌计数结果>100CFU/g的优势霉菌菌相分析鉴定发现,奶粉中污染的优势霉菌主要为青霉和曲霉。     

对虾急性肝胰腺坏死病病原菌RAA检测方法的建立

针对对虾急性肝胰腺坏死病（acute hepatopancreatic necrosis disease,AHPND）病原菌检测,建立了一种重组酶介导等温扩增（recombinase acid amplification,RAA）检测方法。根据pVA1质粒保守序列设计特异性探针和引物,分别以不同稀释浓度梯度的含pirB靶序列的重组质粒pMD18-T-pirB为模板进行荧光RAA法检测,评价其灵敏度;对溶藻弧菌、河流弧菌、创伤弧菌等病原菌进行荧光RAA法检测,评价其特异性;取8.2×103 copies/μL浓度的pMD18-T-pirB重组质粒进行荧光RAA试验,评价其重复性;对人工感染样品用RAA方法进行应用试验,以水产行业标准（SC/T 7233—2020）推荐的荧光探针PCR法作为平行对照。结果显示：该方法可对pirB靶序列基因片段进行有效扩增,最低检出限为8.2×101 copies/μL,与其他病原菌无交叉反应,重复试验变异系数为0.41%,与荧光探针PCR方法符合率为100%。结果表明,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好、操作步骤简单,可用于对虾样品的AHPND现场检测。本研究为AHPND快速检测提供了技术支撑。     

水产品流通及市场监管相关政策分析

水产品是一种十分重要的农副产品,也是十分重要的大众食品,因而保证水产品质量安全十分必要。在水产品流通过程中,为保证其流通秩序良好并保障其产品质量,加强市场监管十分重要。本文针对水产品的流通及市场监管相关政策进行分析,以期为水产品流通提供更好的支持。     

微流控芯片技术检测虾四种病原微生物方法的建立

针对虾的白斑综合征病毒、桃拉综合征病毒、黄头病毒和十足目虹彩病毒1的基因保守序列设计LAMP引物,将引物包被于芯片反应槽中,将微流控芯片技术与LAMP等温扩增技术相结合,建立针对这四种病毒的高效准确检测方法。用不同浓度的病毒阳性模板检测了建立的检测方法对4种虾病毒与另1种常见虾病毒的特异性,并对20份阳性和30份阴性虾组织样本的特异性、敏感性和重复性进行了临床对比验证实验。结果表明：本研究方法灵敏度高,特异性强,重复性好,各病毒间无交叉反应,为同时快速检测虾的四种病毒提供了技术手段。     

副结核分枝杆菌MAP0862蛋白的重组表达及抗原性分析

为了验证MAP0862蛋白在副结核分枝杆菌感染鉴别诊断中的作用,试验以从发病山羊消化道病料中提取的副结核分枝杆菌基因组DNA为模板,克隆MAP0862基因并构建重组表达载体pET28a-MAP0862,然后对其进行诱导表达及Western-blot分析。结果表明:检测到的羊副结核分枝杆菌MAP0862基因与GenBank中K10菌株基因完全相同;重组表达载体pET28a-MAP0862经IPTG诱导表达出约40 ku的目标蛋白,与预期结果相符;Western-blot对比分析显示, MAP0862蛋白只与羊副结核阳性血清发生显色反应。说明MAP0862蛋白具有良好的免疫反应原性和特异性。     

进出口食品菌落总数检测的注意事项

总结了进出口食品菌落总数检测的注意事项,包括环境条件、工具器皿、培养基、样品处理、样品稀释与平板接种、菌落培养与菌落计数等内容,以供参考。     

恒河猴源大肠杆菌的分离鉴定及耐药性和致病性

为了查明引起海口市某进境实验动物隔离场3例恒河猴死亡的原因，本试验分别采集3只恒河猴的心脏、肝脏、脾脏、肺脏和淋巴结样本，进行细菌分离，通过细菌形态特征、显微镜镜检、生化鉴定、16S核糖体RNA(16S rRNA)序列分析对分离菌进行病原学鉴定；采用纸片扩散法(K-B法)测定分离菌的耐药表型；采用玻片凝集法测定分离菌的血清型；采用动物回归试验分析分离菌的致病性。结果显示，从3只恒河猴上各分离鉴定出1株大肠杆菌，命名为H01株(分离自脾脏)、H02株(分离自淋巴结)和H03株(分离自肝脏);3株大肠杆菌对12种常用抗菌药物产生不同程度耐药，并且都呈现多重耐药，其中对阿莫西林、庆大霉素、氯霉素、氟苯尼考和复方新诺明表现为耐药，仅对阿莫西林-克拉维酸钾、阿米卡星和多黏菌素B表现敏感；玻片凝集试验显示，H01株的血清型为O8,H02株的血清型为O3,H03株的血清型为O9;动物回归试验显示，3株分离菌都是强毒株。本试验为实验动物恒河猴源大肠杆菌病的防治提供参考依据。