鳗弧菌单克隆抗体-胶体金检测方法的建立

以灭活鳗弧菌(SMW5)全菌为抗原,应用杂交瘤技术,制备了鳗弧菌单克隆抗体3株,分别命名为1H9、1C12、6F8,细胞亚类分别为IgG2a、IgM、IgG2b,其中1H9腹水效价为1∶6.4×105。制备鳗弧菌(SMW5)兔多克隆抗体,效价为1∶3.2×105。应用纳米胶体金颗粒标记单克隆抗体1H9并制备金标垫,抗鳗弧菌(SMW5)兔多克隆抗体与羊抗鼠抗体作为捕获抗体包被硝酸纤维素膜,分别作为检测线T和质控线C,建立鳗弧菌的胶体金免疫层析快速检测方法。经过对试纸条的特异性和灵敏度测定,结果表明:试纸条与嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、豚鼠气单胞菌、创伤弧菌、副溶血弧菌、副溶藻弧菌、迟缓爱德华氏菌,7种水产常见病原菌没有交叉反应,与鳗弧菌特异性反应,检测灵敏度为6.3×104cfu·mL~(-1),检测所需时间低于10min。所制备的鳗弧菌胶体金免疫层析检测试纸条具有快速、简便、特异性高和适应基层生产推广应用等优点。     

河蚬中活性蛋白CFp-a的分离纯化及其活性

采用硫酸铵分级沉淀 ,BlueSepharose 6FastFlow、SPSepharoseFastFlow和HPLC柱层析 ,从河蚬 (Corbiculafluminea)中分离纯化蛋白CFp a。经SDS PAGE测定 ,其分子量为 2 4 .0kD ;经苯酚硫酸法测定 ,其含糖量为 2 .3%。 10～ 16 0 μg/mLCFp a分别处理肝癌细胞BEL74 0 4 72h后 ,采用四氮唑还原法 (MTT)检测癌细胞的生长活性 ,结果显示 ,CFp a对BEL74 0 4癌细胞生长的抑制率在 2 4 .6 %～ 79.2 %。采用质量浓度为 2 0 μg/mL和 4 0 μg/mL的CFp a分别处理BEL74 0 4 4 8h后 ,用流式细胞仪 (FCM)检测细胞凋亡 ,可以在DNA直方图上观察到典型的亚“G1”峰 ,凋亡率分别为 10 .99%和 15 .5 1%。