金银花、连翘及其药对对马链球菌马亚种耐药基因和毒力基因的影响

【目的】 研究金银花、连翘及金银花-连翘药对(金银花-连翘1∶1)对北疆地区携带fneB毒力基因的马链球菌马亚种(Streptococcus equi subsp. equi, SEE)耐药基因和毒力基因的影响。【方法】 首先对1 g/mL的金银花、连翘及金银花-连翘药对(金银花-连翘1∶1)水提物进行中药配比浓度梯度试验, 然后与携带fneB毒力基因的L1菌株、lytA+fneB+ply毒力基因的D1菌株和qnrA+bla_TEM+fneB基因的Y1菌株3种SEE菌株共培养, 检测中药对SEE菌株耐药基因bla_TEM、qnrA及毒力基因ply、fneB的影响; 将192只SPF级昆明小鼠均分为16组: 空白对照组(生理盐水)、金银花组、连翘组、金银花-连翘1∶1组、阴性对照组(Y1、L1和D1菌株组)及3种菌株分别与金银花、连翘和金银花-连翘1∶1共培养组, 各组药物或菌液经腹腔注射0.5 mL进行小鼠体内抑菌试验, 检测药物对小鼠的致病性和fneB毒力基因的影响。【结果】 中药最适配比浓度为中药水提物∶THB培养基∶待测菌液(D_{600 nm}值均为0.6)为1 000 μL∶500 μL∶20 μL; 与中药水提取物共培养的3株SEE菌株均未检出耐药基因和毒力基因, 且菌株形态结构均未发生改变。小鼠致病性试验结果显示, 阴性对照组的小鼠成活率分别为16.7%、8.3%和0;而L1+连翘、L1+金银花共培养组小鼠存活率分别为83.3%、75.0%, 金银花-连翘1∶1药对与3株SEE菌株共培养组小鼠成活率分别为41.7%、16.7%、50.0%;小鼠病理解剖结果显示, 除接种SEE菌株的小鼠肝脏肿大淤血、边缘钝圆外, 其余各组肝脏均正常。小鼠体内fneB毒力基因检测结果显示, Y1+金银花、Y1+连翘、Y1+金银花-连翘1∶1、L1+金银花、L1+金银花-连翘1∶1、D1+金银花、D1+连翘、D1+金银花-连翘组均携带fneB毒力基因, L1+连翘组未检出fneB毒力基因, 表明小鼠体内SEE菌株有重新获得fneB毒力基因的能力, 出现菌种反毒复壮, 其机制有待进一步研究。【结论】 金银花、连翘及金银花-连翘药对能够减弱SEE菌株的毒力基因和耐药基因, 从而对马腺疫疾病的防治具有指导意义, 为减抗、替抗提供理论支撑。     

莪术油注射液体外抗猪细小病毒的试验

制备莪术油注射液,评价莪术油注射液体外对猪细小病毒(PPV)7909标准毒株的作用效果。在PK-15细胞上,通过不同加药方式观察PK-15细胞病变(CPE),用MTT法测定细胞活力。结果在PK-15细胞上,药物最大安全浓度(TD0)为86.4μg/mL,半数感染浓度(TD50)为162.2μg/mL;在药物安全浓度范围内,莪术油注射液对PPV 7909标准毒株的半数抑制浓度(IC50)为1.865μg/mL,半数阻断浓度(IC50)为3.75μg/mL,半数直接杀灭作用浓度(IC50)为81.2μg/mL。结果表明莪术油对PPV 7909标准毒株有明显的体外抑制作用,但直接杀灭作用不明显。     

成纤维上皮细胞炎症反应模型的建立

利用培养金黄色葡萄球菌培养基过滤液建立成纤维上皮细胞炎症反应模型，用于观察和研究炎症反应过程中细胞形态的变化。将培养金黄色葡萄球菌培养基除菌过滤冻干，用细胞培养基稀释，按照一定蛋白含量加到上皮细胞的培养基中，制作细胞炎症反应模型。结果显示，成纤维上皮细胞发生炎症反应，高浓度细菌滤过液的细胞形态发生变化，细胞边缘模糊不清，细胞出现空泡，随着培养时间的延长低浓度的大量大型细胞开始增加；在添加金黄色葡萄球菌培养基滤过液培养24h后利用^3H—TdR方法测定细胞增殖率，细胞增殖差异是显著的。结果表明，建立细胞炎症反应模型是可行的，并为以后炎症反应机理研究和抗炎性反应药物研究奠定了基础。     

马梨形虫病的诊治

通过病原学调查、临床诊断及实验室血液涂片镜检等方法对新疆库尔勒某马场梨形虫病病例进行诊断,同时对该马场其余12匹临床表现正常的马进行血液涂片镜检,其中5匹被确诊为隐性感染。针对该马场马匹的发病情况,制定出相应的治疗及预防措施,效果显著,为马梨形虫病的诊治提供参考。     

牛源大肠杆菌O157:H7的分离鉴定

为调查新疆部分地区E.coli O157：H7的感染情况和菌株致病性,从新疆阿克苏、伊犁、塔城3个地区的牛场采集新鲜粪样564份,对E.coli O157：H7进行分离与鉴定。利用E.coli营养肉汤（EC肉汤）对样品进行增菌后,用山梨醇麦康凯培养基（SMAC）平板选择性培养,再经过4-甲基伞形酮-β-D葡萄糖醛酸苷培养基（MUG）的筛选,对疑似菌株进行生化和PCR鉴定,并将分离鉴定到的菌株进行小鼠攻毒试验。结果显示,从伊犁地区采集的样品中共分离出2株E.coli O157：H7（Y166和Y226）,其检出率为0.88%;小鼠攻毒试验中,Y166和Y226试验组小鼠在48 h内全部死亡,具有一定致病性;从阿克苏、塔城所采样品中未分离到E.coli O157：H7。     

猪胚胎多能性干细胞的分离培养

收集妊娠26．0～29．0d的猪胚胎，分离培养原始生殖细胞(PGCs)，在STO细胞饲养层上生长，形成了多能性干细胞(EG)。发现其具有干细胞的显著特性，并能在体外定向分化为神经细胞、上皮细胞和胚泡细胞。试验使用A、B、C3种不同的培养基培养PGCs，结果在形成EG细胞集落的数量和EG细胞分化上有着明显的差距，说明血清的质量和浓度以及细胞因子对干细胞的生成和增殖有着重要的影响。     

中草药标本室的建立对中兽医药与方剂学课程的影响

为了更好地开展中兽医药与方剂学课程的教学和科学研究,使学生了解和掌握中草药物和方剂的理论学习,通过制作中草药饮片标本、干制标本、蜡叶标本和浸制标本,不断地建立和完善中草药标本室,也可以通过中草药标本二维码数据库的建立、常见植物标本的种植栽培,以及野外采集中草药实践教学的实施,提高学生对中兽医药与方剂学课程的学习质量,以期为今后临床实践和应用打下良好的理论基础。     

绵羊脐带间充质干细胞的分离、体外培养及诱导分化

通过多重酶混合消化法和胰酶消化筛选法体外分离、纯化及培养绵羊脐带间充质干细胞(MSCs),并观察其生物学特性,以此建立绵羊脐带间充质干细胞的分离培养流程.试验采集健康的哈萨克羔羊脐带组织,剔除血管后剪碎,添加复合消化酶消化24 h得到细胞,胰酶消化法筛选除杂并观察细胞形态,绘制第1代、第5代及第10代细胞生长曲线;取第10代细胞检测其体外诱导成骨细胞能力和诱导成脂细胞能力,cAKP染色检测其分化状态.结果表明,获得的细胞经传代培养达10代后无明显的形态和增殖能力改变;体外诱导成骨细胞和成脂细胞试验证明其具有被诱导分化成骨细胞和脂肪的能力,cAKP染色证明其处于未分化状态.试验获得的绵羊脐带间充质干细胞能在体外培养、扩增并且具有和骨髓间充质干细胞类似的生物学特征.     

鸡新城疫病毒的分离与初步鉴定

近几年,乌鲁木齐周边地区常发生一种以呼吸困难和气管环严重出血为特点的鸡病,各日龄、多品种鸡均可发病,而且没有明显的季节性,治疗效果差,死淘率高,对养殖业危害巨大.为了探求该类疾病与新城疫的相关性,于2011年7～12月期间,以乌鲁木齐周边地区发病三黄鸡群为研究对象,采集有出血病变病死鸡气管环病料,常规研磨处理后,接种鸡胚并收集尿囊液,用血凝与血凝抑制试验检测是否有新城疫病毒,并用血凝阳性尿囊液接种5日龄三黄雏鸡检测是否具有致病性.