无乳链球菌LIP蛋白的截短表达及免疫保护性研究

为评价罗非鱼源无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)BX2012株脂蛋白(lipoprotein)的免疫原性及其对奥利亚罗非鱼(Oreochromis aureus)和大菱鲆(Scophthalmus maximus)的保护效果,以无乳链球菌脂蛋白基因序列(GenBank序列号:CP000114.1,SAK_0321)的B细胞线性抗原表位区设计特异性引物进行扩增,构建重组表达载体,将截短表达的脂蛋白制备成亚单位疫苗,同时制备灭活疫苗进行免疫比对。结果显示:重组表达载体p ET-32a-LIP342在BL21(DE3)中获得了良好的可溶性表达,分子质量约为30 kDa,纯化使LIP342纯度由41.75%提至87.23%;Western blotting分析显示,LIP342可被兔抗无乳链球菌高免血清特异性识别;LIP342在目前已知不同种属来源或不同血清型的无乳链球菌分离株中同源性为90.35%~100%,在罗非鱼源分离株中同源性为100%;无乳链球菌LIP342蛋白和灭活疫苗均可显著提升奥利亚罗非鱼和大菱鲆血清抗体水平,而LIP342诱导的血清抗体水平均显著高于灭活疫苗;经0.1 mL 1×10~9cfu/mL的无乳链球菌攻毒后,LIP342蛋白和灭活疫苗对供试鱼的累积存活率均显著高于PBS对照组。结果表明,高度保守的LIP342具有较好的免疫原性,可作为无乳链球菌亚单位疫苗候选因子。     

利用不同实时定量PCR方法分析相对基因表达差异

利用实时荧光定量PCR方法分析目标基因转录本之间的表达差异,目前常用的分析实验数据的有绝对定量和相对定量方法。为了克服绝对定量方法的繁琐和简化相对定量的分析方法,分别利用2^-ΔΔCT、2^-ΔCT和标准曲线法对水稻OsRDB1基因在不同化学试剂和激素处理下的表达差异进行了分析,发现2^-ΔΔCT必须引入标准的看家基因作为参考,计算方法繁琐,计算结果受扩增效率影响;而利用2^-ΔCT和标准曲线法计算方便,节省定量PCR试剂,但其结果易受到RNA浓度测量准确率的影响,其中标准曲线法引入斜率消除扩增效率的影响,最能测得实际的原始拷贝数差异。     

OsI2基因的克隆及其植物表达载体的构建

在旱稻IRAT109干旱胁迫下cDNA芯片分析结果的基础上,通过RT-PCR,5'-RACE及3'-RACE方法,从IRAT109总RNA中扩增得到了干旱胁迫下芯片表达谱中上升表达强度第二的基因全长序列,命名为OsI2,全长有523 bp,并对基因序列结构进行了分析.该基因与全长cDNA文库中的CT836140.1有99%同源.OsI2基因编码产物对应1个包含57个氨基酸的开放阅读框(ORF),为一功能未知蛋白.其编码产物也可能对应两个中间相隔19 bp的较小ORFs(43个氨基酸和42个氨基酸),都是功能未知的蛋白.在pBI121载体的基础上,将OsI2基因与CaMV35S连接成功构建了pBl121-OsI2植物表达载体,为进一步研究其功能创造了条件.     

335份旱稻核心样品的构建

通过方差分析和多重比较，评价了36种预选核心样品的遗传多样性，筛选出最适于本研究的核心样品构建方法，即25％总体取样量一多样性取样比例一组内聚类取样。并依据此方案构建了总数为84的旱稻核心样品。经2a重复实验，从多样性指数、质量性状、数量性状和群体结构四个方面所选核心样品的代表性进行评价和补充，最终形成总数为86的旱稻核心样品，该核心样品很好地代表了原始群体的质量性状及数量性状变异。为进一步将旱稻资源应用于水稻抗性改良和抗早稻育种打下良好的基础。     

作物遗传资源核心种质研究进展

对有关作物核心种质的基本内涵、构建核心种质的基本步骤、检验方法的研究进展进行综述，探讨其在种质资源研究和遗传育种中的应用。     

旱稻引进种质的类缘关系与农艺特征分析

以5份水稻籼粳种质作对照，对15份引进早稻种质的类缘关系进行分析。结果表明，2份早稻种质属于籼稻，5份偏籼，4份偏粳，4份粳稻。对这些早稻种质的主要农艺特征进行了测验；并对其产量构成因子相关性作了分析。单株产量与7个穗部数量性状的相关性分析表明：单株产量与穗总粒数、结实率和穗数相关极显。与穗长相关显；早稻陆引46、IRAT l04、巴西陆稻、早稻297等4份引进种质综合农艺性状较好，单株产量较高，值得进一步种植观察。     

鱼类同工酶应用及研究进展

阐述了鱼类同工酶研究进展,囊括同工酶在鱼类分类、发育遗传学、系统发育、生化遗传变异、多倍体研究及其组织特异性等方面的应用,并提出现存问题及发展方向。     

菜蓟提取复合物对罗非鱼生长性能和肝脏保护效果的评价

菜蓟为双子叶植物药菊科菜蓟的叶,有利胆和保肝作用,并有抗脂肪肝功效。试验采用的菜蓟提取复合物,其有效成分主要包括菜蓟提取物和氯化胆碱等,试验验证菜蓟提取复合物对尼罗罗非鱼生长性能、肝脏抗氧化机能、血浆生化指标和肝细胞的影响等。试验分为3组：空白对照组、黄曲霉毒素 B1（AFB,100 mg/kg）攻毒阳性组和菜蓟提取复合物添加组（300 mg/kg菜蓟提取复合物+AFB 100 mg/kg）。8周的养殖试验结果表明：饲料中含AFB后,罗非鱼的增重率、特定生长率、成活率比对照组显著降低（P<0.05）,成活率显著降低至50%,而饵料系数则显著提高1倍多（P<0.05）;但在含AFB的饲料中补充了菜蓟提取复合物后,其增重率、特定生长率、成活率和饵料系数得到明显改善,与对照组相比没有显著差异（P>0.05）;AFB的添加导致罗非鱼肌肉水分和肝脏粗脂肪含量显著增加和肌肉粗蛋白含量的显著下降（P<0.05）,而在含AFB的饲料中补充了菜蓟提取复合物后,其肌肉水分、粗蛋白和肝脏粗脂肪含量与对照组相比无显著差异（P>0.05）;AFB的添加使罗非鱼的SOD和CAT活性及MDA生成量较对照组显著提高（P<0.05）;补充菜蓟提取复合物后,MDA生成量较AFB组又显著降低（P<0.05）;罗非鱼的Hct因AFB的添加而显著降低（P<0.05）,而ALT、AST和AGP则显著提高（P<0.05）;菜蓟提取复合物补充后,上述指标又恢复至与对照组相比无显著差异;饲喂含AFB日粮的罗非鱼细胞质空泡化,出现明显的核偏位和严重的脂肪浸润,在含AFB的日粮中补充菜蓟提取复合物后,罗非鱼肝脏组织中形成大量的嗜碱性细胞包围着坏死的细胞,但并未形成明显结节。结果表明,含一定剂量的黄曲霉毒素B1（AFB）的日粮对罗非鱼的生长会造成显著的负面影响,同时导致明显的肝损伤,而菜蓟提取复合物的补充能够减少罗非鱼的死亡,有效地保护其肝脏,并促进罗非鱼的生长。     

影响泥鳅育苗成活率的普遍问题及对策

<正>泥鳅(Oriental weatherfish)因适应性强、对环境要求不高,且肉质细嫩,营养丰富,深受消费者青睐,已成为我国主要的淡水养殖品种之一。泥鳅的苗种需求逐步增大,但是,泥鳅苗种培育却因几个普遍问题限制了成活率,导致很多育苗企业乃至部分地区的泥鳅养殖规模。笔者结合近几年国内泥鳅育苗的经验教训,将影响泥鳅育苗成活率的这几个普遍问题及对策总结如下。1亲鳅选择及比例选择好亲鳅及比例是育苗成功的关键,很多     

一个水稻抗逆候选基因OsHMGB3的鉴定与评价

OsHMGB3是一个位于水稻抗旱QTL区段内的抗旱相关候选基因,预测编码一个具有HMGB-UBF-HMG-box结构域的蛋白。Real-time PCR分析表明:OsHMGB3基因在多个组织器官中表达,且能够受到PEG、NaCl、低温、高温等逆境及ABA的诱导表达。对超表达OsHMGB3的转基因水稻进行了苗期甘露醇胁迫处理,转基因植株的鲜重和株高均极显著优于野生型植株,超表达OsHMGB3可提高水稻苗期抵抗渗透胁迫的能力。该基因对逆境的响应及转基因植株对渗透胁迫的抗性均暗示该基因与水稻抗逆性有密切的关系。