体外诱导牛骨髓间充质干细胞向乳腺样上皮细胞分化的初步研究

为培育转基因肉牛提供种子细胞及进一步丰富牛骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)的多向分化潜能,本试验利用细胞免疫荧光染色方法和分子生物学方法初步探讨在表皮生长因子、胰岛素、催产素和孕酮等条件下,体外诱导牛BMSC向乳腺样上皮细胞分化的可能性。利用不同浓度的诱导液对纯化稳定的P4、P8和P12代牛BMSC进行体外诱导,并对诱导后的细胞进行细胞免疫荧光观察和RT-PCR鉴定。结果显示,诱导后部分BMSC细胞呈多角形,而不再呈明显的梭形和纺锤形,经细胞角蛋白18免疫荧光染色后出现明显的荧光。P4代牛BMSC在诱导液Ⅱ的诱导作用下分化效果显著。RT-PCR结果显示,诱导分化后细胞角蛋白19基因、β-酪蛋白基因及αs1-酪蛋白基因在细胞中表达。因此,在体外,多因子联合诱导可使牛BMSC初步分化为乳腺样上皮细胞并且在诱导液Ⅱ的联合诱导下分化作用最明显。     

昆明小鼠ES细胞的分离培养及鉴定

[目的]摸索一种适合昆明小鼠ES细胞分离培养的方法,以提高昆明小鼠ES细胞的建系率。[方法]分别采用5种方法分离ICM和ES细胞集落,摸索了以BMSCs作为饲养层时,丝裂酶素处理的合适时间。[结果]连续消化法要明显好于其他4种方法。MMC处理BMSCs 1、1.5、2 h时效果较好,3个时间点无显著差异(P>0.05)。mMEF作为饲养层与BMSCs作为饲养层时获得5代ES细胞相比差异不显著(P>0.05)。[结论]连续消化法分离ES细胞效率较高,饲养层采用MMC处理1~2 h的BMSCs饲养层或常规mMEF饲养层对昆白小鼠ES细胞无明显影响。     

浅谈如何做好新时期沂蒙革命老区扶贫开发工作

本文全面介绍了新时期扶贫开发的新特点,深入分析了沂蒙革命老区当前扶贫开发面临的新形势,对如何做好新时期扶贫开发工作的思路和方法进行了深入探讨。     

荷斯坦牛骨髓间充质干细胞的分离培养和体外诱导分化的研究

本试验采用密度梯度离心法来分离纯化和体外培养荷斯坦牛骨髓间充质干细胞,并在体外分别诱导其分化为神经样细胞和脂肪样细胞.结果表明,采用密度梯度离心法可获得纯化度较高的荷斯坦牛骨髓间充质干细胞,并且在一定的诱导条件下能够分化为脂肪样和神经样细胞,为利用骨髓间充质干细胞作为核供体进行核移植的研究和动物遗传资源的保存研究奠定理论基础.     

渤海黑牛H-FABP基因外显子2的序列测定与分析

[目的]为改良渤海黑牛地方品种及种质资源的保护提供技术依据。[方法]根据GenBank发表的牦牛心脏脂肪酸结合蛋白基因（H-FABP）的序列设计1对引物,利用PCR技术扩增出渤海黑牛H-FABP基因外显子2的DNA片段,测定其核苷酸序列并进行氨基酸序列的推导,同时将序列与牦牛、山羊、猪、人、小鼠和鸡的外显子2序列进行比较,并且进行系统发生树的构建。[结果]渤海黑牛的H-FABP外显子2核苷酸序列和氨基酸序列与牦牛、山羊、猪、人、小鼠和鸡各物种间同源性分别为100%、97.1%、94.2%、89.0%、83.8%、79.8%,100%、98.2%、94.7%、86.0%、86.0%、77.2%。系统发生结果显示,系统发生树总体分为两支,鸡单独为一支;渤海黑牛、牦牛、山羊、猪、人、小鼠聚在一起成为另一支。[结论]渤海黑牛H-FABP外显子2具有很强的保守性,H-FABP基因外显子2进化树符合物种进化规律。     

奶牛乳腺成体干细胞的体外分离培养及鉴定试验

[目的]体外分离、培养奶牛乳腺成体干细胞（mammary stem cells,MaSCs）,研究其生物学特性并对其进行扩增和鉴定。[方法]用贴壁筛选法纯化牛MaSCs,传代扩增,测定生长曲线并进行细胞核型分析。[结果]通过体外分离培养获得纯度较高的MaSCs,观察到MaSCs的生物学特性,细胞具有正常核型,分离得到的细胞确实为比较原始的干细胞。[结论]成功地建立了一种分离培养牛MaSCs的方法,分析MaSCs的生物学特性,为进一步深入研究MaSCs的诱导分化及其在乳腺生物反应器中的应用打下基础。     

5-Aza诱导BMSC分化为心肌细胞的分子生物学检测

 【目的】利用分子生物学方法探讨5-氮杂胞苷（5-azacytidine,5-Aza）体外诱导牛骨髓间充质干细胞（bone marrow stromal cells,BMSC）向心肌细胞的分化,为转基因良种肉牛培育提供种子细胞,提高转基因效率。【方法】利用获取的纯化稳定的P4、P8、P12代BMSC各经5、10、15μmol?L-1的5-Aza进行体外诱导分化,统计并计算心肌细胞的转化率,对诱导出现的心肌样细胞进行形态学观察和RT-PCR 鉴定。【结果】诱导后细胞大多呈现梭形,排列方向渐趋一致,有肌管样结构形成。相同代数的BMSC在10μmol?L-1的5-Aza作用下诱导效果最佳;在相同浓度的5-Aza作用下,BMSC向心肌细胞的转化率随着传代次数的增加逐渐降低。RT-PCR显示诱导分化后的细胞明显表达心肌细胞的4种特异性基因,分别是α-心脏肌动蛋白(378bp)、结蛋白（601 bp）、心脏肌钙蛋白T (331 bp)、β-肌球蛋白重链（β-MHC）(273 bp)。【结论】5-Aza体外可诱导牛骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞;利用P4代BMSC在10μmol?L-1的5-Aza的作用,诱导效果明显。     

浅谈如何做好新时期沂蒙革命老区扶贫开发工作

本文全面介绍了新时期扶贫开发的新特点,深入分析了沂蒙革命老区当前扶贫开发面临的新形势,对如何做好新时期扶贫开发工作的思路和方法进行了深入探讨。     

体外诱导牛BMSC向上皮样细胞分化的研究

为培育转基因肉牛提供种子细胞以及进一步丰富牛骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)的多向分化潜能,利用细胞免疫荧光染色和分子生物学方法,初步探讨表皮生长因子和胰岛素体外诱导牛BMSC向上皮样细胞分化的可能性。利用含细胞因子的诱导液对纯化稳定的P4代牛BMSC进行体外诱导,并对诱导后的细胞进行细胞角蛋白18的细胞免疫荧光观察和细胞角蛋白19的RT-PCR鉴定。结果表明,诱导后细胞经细胞角蛋白18免疫荧光染色后出现明显的荧光。RT-PCR结果显示诱导分化后细胞角蛋白19基因在细胞中表达。因此,在体外,表皮生长因子和胰岛素可诱导牛BMSC初步分化为上皮样细胞。