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线粒体抗病毒信号蛋白（mitochondria antiviral signaling protein,MAVS）在脊椎动物的抗病毒免疫反应中起着非常重要的作用。为了后续研究MAVS跨膜区氨基酸在病毒侵染宿主细胞时所发挥的作用,通过基因工程方法,构建了MAVS基因C端跨膜结构域缺失突变体（MAVSΔTM）。首先通过PCR技术扩增MAVSΔTM基因片段,通过无缝克隆技术连接到pcDNA3.0-Flag载体上,后经酶切鉴定及测序结果表明MAVSΔTM基因成功克隆到pcDNA3.0-Flag载体上,并将重组质粒定名pcDNA3.0-Flag-MAVSΔTM。将重组质粒pcDNA3.0-Flag-MAVSΔTM转染至人肾上皮细胞（HEK-293T）细胞中,利用蛋白免疫印迹实验和间接免疫荧光技术检测pcDNA3.0-Flag-MAVSΔTM的表达以及定位情况。结果显示,pcDNA3.0-Flag-MAVSΔTM在293T细胞中成功表达,并且均匀分布于细胞中。研究将为进一步研究MAVS蛋白跨膜区氨基酸的功能奠定基础。 相似文献
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