鸡原始生殖细胞中lncRNA-CEPT8编码小肽能力的研究

为探究lncRNA在鸡生殖细胞中的调控作用,以如皋黄鸡受精蛋为试验材料,基于高通量测序筛选结果,利用RACE技术获取lncRNA-CEPT8序列全长,通过荧光定量检测和核质分离试验确定lncRNA-CEPT8的富集位置,并进行ORF开放阅读框预测及构建原核融合表达载体,提取蛋白质后利用Western blot技术检测lncRNA-CEPT8编码的小肽。结果表明:lncRNA-CEPT8全长为1 248 bp,在鸡原始生殖细胞质中富集,具有大小为246 bp且编码81个氨基酸的ORF, Western blot检测结果表明lncRNA-CEPT8编码一条大小约为9 ku的小肽。这一研究为进一步探究lncRNA-CEPT8编码的小肽在鸡原始生殖细胞中的调控作用及其对生殖细胞的影响奠定了基础。     

鸡舍不同位置对有窗式鸡舍内环境指标的影响

试验采用自然沉降法和纳氏试剂法,研究有窗式鸡舍内不同位置对温度、相对湿度、氨气浓度和细菌总数等环境指标的影响。结果表明:东西走向上,细菌总数存在显著差异,东部显著高于西部(P0.05),其他各环境因子差异不明显(P0.05);南北走向上,相对湿度和氨气浓度差异明显,南部显著高于北部(P0.05),而温度和细菌总数差异不显著(P0.05)。另外,鸡舍内外环境之间也存在一定差异。研究结果表明,有窗式鸡舍内不同位置其环境指标有所不同,应该适当利用环境调控手段如通风、控温等,以创造出相对均衡一致的养殖环境。     

睾丸注射Mx-NA双基因制备抗病转基因鸡的研究

本研究利用精原干细胞介导法体内转染重组载体pVITRO2-Mx-NA以生产抗病转基因鸡。采用睾丸注射法将脂质体包裹的线性化质粒通过随机打点注射入公鸡睾丸,采集25、50、60、70d后试验公鸡的精液,提取基因组DNA,采用常规PCR检测外源Mx-NA联合基因的整合;转染后60d采集阳性公鸡精液人工授精母鸡,采用PCR和Western blot方法检测后代血液中外源NA-Mx联合基因的表达情况。结果表明:PCR检测证实外源Mx-NA联合基因已在精子基因组中表达,精液PCR阳性率为33.33%(2/6),且能通过体外受精在后代中检测到,后代PCR检测的阳性率为31.43%(11∕35),Western blot检测F1代阳性率为28.6%(10/35)。以上结果证明外源Mx-NA基因能稳定整合到鸡的基因组中,表明睾丸注射法是一种操作简单、有效的制备抗病转基因鸡的方法。