神经生长因子对小鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响

本研究旨在探索神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对小鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响。试验建立了小鼠卵巢颗粒细胞的原代培养体系,并通过免疫荧光技术对颗粒细胞进行鉴定和检测NGF及其受体在卵巢颗粒细胞上的表达,采用MTS法检测不同浓度的NGF对昆明小鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响。卵巢颗粒细胞在10、50、100、500 ng/mL NGF作用24 h,用酶标仪测定细胞D_{490 nm}值,试验组与对照组相比均有促进增殖的影响（P<0.05）,50 ng/mL NGF试验组与对照组相比差异极显著（P<0.01）。结果表明,NGF在昆明小鼠的卵巢颗粒细胞中有表达,在一定浓度范围NGF可以促进卵巢颗粒细胞的增殖。     

丙酸睾酮对小鼠睾丸NT-3和NT-4表达的影响

以30日龄雄性小鼠为研究对象,用丙酸睾酮分别处理小鼠6,12,24 h后收集睾丸,提取睾丸总RNA和总蛋白,通过实时荧光定量和Western-Blot方法探究了雄激素对睾丸中神经营养因子NT-3及NT-4表达的影响。荧光定量结果表明:丙酸睾酮处理小鼠,12 h组和24 h组NT-3及NT-4的表达显著升高,其他各组间无显著差异。Western-Blot结果与荧光定量结果一致。说明丙酸睾酮能够调节小鼠睾丸中NT-3和NT-4的表达。     

猪RBP-4基因原核表达载体的构建及表达

为构建猪RBP-4基因原核表达载体,并在大肠杆菌中表达蛋白。取成年母猪正常卵巢组织提取总RNA,RT-PCR后回收扩增产物,构建表达载体pEASY-E1-RBP4,转化BL21(DE3)pLysS,IPTG诱导表达。测序结果显示,RT-PCR获得的cDNA全长序列与GenBank中的序列基本一致。原核表达产物经SDS-PAGE电泳鉴定,其以包涵体形式表达。试验成功构建了猪RBP4基因原核表达载体,并在大肠杆菌中表达,为后续蛋白纯化及抗体的制备奠定基础。     

雌激素对小鼠子宫BDNF、NGF表达的影响

以21日龄雌性小鼠为研究对象,用雌激素处理一周后收集子宫,苏木素-伊红(HE)染色法观察到子宫发生水肿、内膜外膜明显增厚。提取子宫总RNA和总蛋白,通过实时荧光定量和Western-Blot方法检测雌激素对子宫中神经营养因子BDNF及NGF的表达。荧光定量结果表明:试验组BDNF表达显著升高、NGF表达显著降低。Western-Blot结果与荧光定量结果一致。这说明雌激素能够调节小鼠子宫中BDNF和NGF的表达。     

神经生长因子对猪卵丘细胞扩散及卵母细胞体外成熟的影响

利用光学显微镜观察及地衣红染色方法,探究猪卵母细胞体外成熟过程中添加神经生长因子(NGF对猪卵丘细胞扩散和卵母细胞成熟的影响.结果表明:在猪卵母细胞体外成熟过程中添加NGF对猪卵丘细胞扩散无明显影响;单纯添加NGF并不能显著改变第二次减数分裂中期(MⅡ期)卵母细胞的比率,但却可以显著提高生发泡期(GV期)卵母细胞比率.当NGF与促性腺激素(eCG和hCG)联合作用时,MⅡ期卵母细胞比率相对于单纯地促性腺激素作用有显著提高.     

脑源性神经营养因子抑制牛卵泡颗粒细胞凋亡

为研究脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)对牛卵泡颗粒细胞凋亡的影响。首先利用CCK8检测了不同浓度(0,10,50,100,200 ng/m L)的BDNF处理牛卵泡颗粒细胞24 h之后细胞活性变化情况,发现50,100,200 ng/m L的BDNF都能够极显著的增加颗粒细胞的活性(P0. 01)。以100 ng/m L作为BDNF最适处理浓度,利用流式细胞仪,通过线粒体膜电位检测(JC-1)发现,BDNF组的红绿荧光相对比例极显著的升高(P0. 01)。接着利用实时荧光定量PCR方法,发现BDNF导致P53、Bax和Caspase-3的mRNA表达水平极显著降低(P0. 01),而Bcl-2无显著变化(P0. 05)。最后通过siRNA干扰内源性的BDNF的合成(P0. 01),利用实时荧光定量PCR方法发现,干扰BDNF之后,P53极显著的升高(P0. 01),Bax显著升高(P0. 05),Bcl-2和Caspase-3无显著差异(P0. 05)。结果表明:BDNF对牛卵泡颗粒细胞的凋亡有抑制作用,为牛卵泡的发育和颗粒细胞功能的研究提供了新的途径。     

miRNA-205在猪卵母细胞成熟过程中表达规律及其调控作用的研究

The research aimed to assess the expression profile and regulatory functions of miRNA-205 in pig oocyte in vitro maturation. The potential target of miRNA-205 was predicted by biology software including TargetScan and microRNA.org. The expression profile of miRNA-205 and its target gene were detected by Real-time PCR in pig cumulus-oocyte complexes(COCs) in vitro maturation 0, 24 and 48 h. The expression of miRNA-205 in pig COCs maturation gradually increased, 0 h lowest, 48 h maximum. The expression of miRNA-205 was significantly reduced in mature solution added EFG, FSH and LH compared with which in a basic mature solution, the expression of PTX3 and cumulus proliferation-related genes including TNFAIP6 and HAS2 were significantly increased. The expression of PTX3 was negative correlation with that of miRNA-205 in porcine oocyte maturation. From these results could be concluded that the miRNA-205 conserved sequence specifically bound to 3′-UTR region of PTX3 gene might be participated in the regulation of oocyte maturation.