中国对虾SRAP分子标记体系正交优化及在遗传多样性分析中的应用

利用正交设计L16(45)对影响中国对虾SRAP分子标记分析的5个因素(Taq酶,Mg2+,模板DNA,dNTP和引物浓度)在4个水平上进行了优化,筛选出各反应因素的最佳水平为:20μl反应体系中包含1.0UTaq酶,2.0mmol/L的Mg2+,40.0ng的模板DNA,0.125mmol/L的dNTP以及0.4μmol/L的引物,退火温度为53.5℃。研究表明,各因素的不同水平对扩增结果有显著影响,其中Mg2+影响最大,影响大小顺序依次为Mg2+,Taq酶,引物,dNTP和模板DNA。利用优化的SRAP分子标记体系对中国对虾"黄海1号"第12世代选育群体进行了遗传多样性分析,实验结果表明,此标记技术可作为中国对虾遗传分析的良好技术工具。遗传多样性分析共筛选出8对可以扩增出清晰稳定条带的引物组合,共获得171个位点,其中多态性位点154个,占90.08%;有效等位基因数为1.7741,期望杂合度均值为0.4219,Shannon多样性指数为0.6055。上述参数值均高于应用AFLP技术对前几代选育群体的遗传多样性分析结果。     

中国对虾生长性状的遗传力和遗传相关估计

[目的]对中国对虾生长性状的遗传力和遗传相关进行估计,为中国对虾的选择育种提供基础依据和技术参数。[方法]采用人工授精技术建立了51个全同胞家系（包括35个半同胞家系）,分别测定了中国对虾150日龄时各家系的体长、头胸甲长、腹节长和体重。应用数量遗传学原理,采用方差、协方差分析的方法,研究了中国对虾150日龄时生长性状的遗传力及性状间的遗传相关和表型相关。[结果]中国对虾体长遗传力的估计值在0,36—0．51,头胸甲长的遗传力估计值在0．14—0．24,腹节长的遗传力估计值在0．25～0．50,而体重的遗传力估计值在0．04～0．29。中国对虾各生长性状表现出高的正相关,其中体重和腹节长的遗传相关最大（为0．92）,其次为体长和腹节长（0．91）、体长和体重（O．88）、体重和头胸甲长（O．87）、腹节长和头胸甲长（0．86）之间的遗传相关,以体长和头胸甲长之间的遗传相关最小（0．83）。[结论]中国对虾体长、头胸甲长、腹节长和体重性状表型相关在0．80一O．90,t检验均达到极显著水平（P〈0．01）。     

不同饵料方案对煎蛋水母生长的差异性影响

为了进一步优化人工养殖煎蛋水母的饵料方案,分别采用7种饵料及其组合(单一饵料源:海月水母、颗粒饲料、糠虾、丰年虾;组合饵料源:海月水母+颗粒饲料、海月水母+糠虾、海月水母+丰年虾)对煎蛋水母开展了为期30 d的饲养试验,比较了不同方案对煎蛋水母体质量、伞径和口腕长等3个生长指标的影响。结果显示,当试验结束时,各组煎蛋水母的生长指标均有增长,其中,海月水母+糠虾组煎蛋水母最终体质量(45.605 g)与其余6组差异极显著(P<0.01),该组的伞径(9.108 cm)除与海月水母+丰年虾组(8.892 cm)差异不显著(P>0.05)外,与其它5组差异极显著(P<0.01);4个单一饵料源试验组煎蛋水母的体质量和伞径增长均较慢,3个组合饵料源试验组水母的生长速度较单一饵料组快,其中海月水母+糠虾组煎蛋水母的体质量和伞径增长最快,而糠虾组水母的口腕长增长最快。     

中国对虾生长性状的遗传力和遗传相关估计

[目的]对中国对虾生长性状内遗传力和遗传相关进行估计,为中国对虾的选择育种提供基础依据和技术参数。[方法]采用人工授精技术建立了51个全同胞家系（包括35个半同胞家系）,分别测定了中国对虾150日龄时各家系的体长、头胸甲长、腹节长和体重。应用数量遗传学原理,采用方差、协方差分析的方法,研究了中国对虾150日龄时生长性状的遗传力及性状间的遗传相关和表型相关。[结果]中国对虾体长遗传力的估计值在0.36～0.51之间,头胸甲长的遗传力估计值在0.14～0.24之间,腹节长的遗传力估计值在0.25～0.50之间,而体重的遗传力估计值在0.04～0.29之间。中国对虾各生长性状之间表现出高的正相关,其中体重和腹节长的遗传相关最大为0.92,其次为体长和腹节长（0.91）、体长和体重（0.88）、体重和头胸甲长（0.87）、腹节长和头胸甲长（0.86）之间的遗传相关,以体长和头胸甲长之间的遗传相关最小（0.83）。[结论]中国对虾体长、头胸甲长、腹节长和体重性状表型相关在0.80～0.90之间,t检验均达到极显著水平（P〈0.01）。     

色素添加对咖啡金黄水母体色影响的初步研究

在人工繁殖水母的饵料中添加食用性人工合成色素、人工合成荧光色素、天然虾青素、铁元素和饲喂含有色素的海蜇等,测定水母采食饵料后感官指标、酪氨酸酶活力和总类胡萝卜素含量的变化,分析添加物质对水母生理机能的影响。试验结果显示,4种人工食用色素均能大大提升水母的观赏性,但颜色保持时间短,3 h后,所有水母均恢复原来的体色,水母状态未发现改变。水母注射水溶性荧光色素,10 h后才能通过水循环扩散到全身,荧光色维持时间可达30 d。水母饲喂天然虾青素、铁元素和含有色素的海蜇1个月后,肉眼观察,海蜇组的水母比对照组的水母颜色深,而虾青素组、FeSO_4组与对照组差异不明显。各组酪氨酸酶活力和总胡萝卜素含量均较低。组内个体间酪氨酸酶活力差异较大,但各组间差异均不显著(P>0.05)。总胡萝卜素在450 nm处吸收值最高。海蜇组水母的酪氨酸酶活力和总胡萝卜素含量均最高,分别为0.133 U/mL和251.01 mg/kg。虾青素组酪氨酸酶活力最低,为0.109 U/mL。食用色素组总胡萝卜素含量最低,仅为158.83 mg/kg,酪氨酸酶活力仅高于虾青素组,可能与色素并未在表皮和中胶层形成色素沉淀有关。试验结果表明,人工添加色素能获得颜色各异的水母,水溶性荧光色素能长期保存在动物体内,可作为体色调控色素。水母的色素合成与酪氨酸酶活力和总胡萝卜素含量有关。     

“黄海1号”中国明对虾抗逆性状SRAP标记

采用序列相关扩增多态性(sequence-related amplified polymorphism,SRAP)分子标记技术,结合分群分析法(bulk segregate analysis,BSA)对中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)高氨氮和高pH胁迫敏感组和耐受组进行分析研究,筛选出与高氨氮或高pH耐受性相关的遗传标记.应用110对SRAP引物进行筛选研究,根据在BSA基因池产生的差异,筛选出与高氨氮耐受相关引物77对,与高pH耐受相关引物102对,以用于验证分析.根据片段在群体中出现频率和变化规律,筛选出6个可能与高氨氮耐受性相关的分子遗传标记,其中耐受高氨氮负相关标记1个,正相关标记5个；7个可能与高pH耐受性相关的分子遗传标记,其中耐受高pH负相关标记2个,正相关标记5个.对获得的13个序列片段进行回收,连接于pMD-18T载体后转化于大肠杆菌TOP10感受态细胞,进行了克隆和测序.将测序结果进行了BLAST分析比对,发现测得片段序列与数据库中序列同源性较低(一般都低于15％),未找到与之同源性较高的功能基因,推论这些特异性序列片段标记可能与高氨氮或高pH耐受性性状密切相关,后续群体验证工作正在进行,以期筛选出与中国明对虾抗逆性状密切相关的序列特征性片段扩增区域(sequence characterized amplified region,SCAR)分子标记,为分子标记辅助育种提供技术支持.