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为制备猫冠状病毒（feline coronavirus, FCoV）核衣壳（nucleocapsid, N）蛋白的特异性抗体，本研究将Ⅰ型FCoV(ZJU1709)的N蛋白基因全长c DNA亚克隆到pCold TF原核表达载体上，通过低温诱导表达、镍柱亲和纯化获得可溶性重组N蛋白；进一步以纯化的重组N蛋白为免疫原制备兔多克隆抗血清（多抗血清），再通过酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）、蛋白质印迹法（Western blotting, WB）、间接免疫荧光试验（indirect immunofluorescence assay, IFA）等多种方法对兔多抗血清进行反应性鉴定。结果显示：经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside, IPTG）和低温诱导，成功表达出分子量约为100 kDa的可溶性重组N蛋白，在非变性条件下亲和纯化获得的重组N蛋白质量浓度达到1.4 mg/mL;N蛋白兔多抗血清的ELISA效价可达1×106，与真核表达的重组蛋白Flag-N以及FCoV... 相似文献
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