小菜蛾对杀螟丹抗性相关序列的代表性差异分析

采用代表性差异分析方法，以小菜峨的敏感品系作为驱赶扩增子，抗杀螟丹近等基因系作为检测扩增子，通过3轮消减杂交得到大小为150—300bp的差异片段，经亚克隆测序并与GenBank等数据库同源比较，发现其中一个亚克隆序列与P450基因有部分同源性，其余亚克隆与已知基因序列的同源性较低，判断这些序列可能是新基因的片段。     

小菜蛾烟碱型乙酰胆碱受体α亚基cDNA片段的克隆和序列分析

利用简并引物，采用PCR等分子生物学技术，对小菜蛾烟碱型乙酰胆碱受体（nAChR)α亚基的cDNA片段进行克隆，并对序列进行分析。测序结果显示，扩增的目的基因片段包含了nAChRα亚基的3种亚型（分别命名为Pxαl，Pxα2，Pxα3）。都具有典型的α亚基的结构；2个相邻的半胱氨酸，由2个半胱氨酸之间二硫键形成包含15个氨基酸的胞外环，与烟碱和α银环蛇毒素结合有关的氨基酸残基，克隆的基因片段在氨基酸序列上和其他昆虫nAChRα亚基基因之间有高达65%-99%的同源性，表明克隆的cDNA片段是小菜蛾nAChRα亚基基因的部分序列。     

小菜蛾对溴氢菊酯抗药性的随机扩增多态性DNA分析

利用室内选育119代的抗溴氰菊酯小菜蛾Plutella xylostella品系和敏感品系，通过反复回交和自交建立近等基因系。用Operon公司合成的20个引物对近等基因系基因组DNA进行PCR扩增。3个引物在抗性品系中分别产生1条特异扩增带，4个引物在敏感品系中分别产生了1～5条特异扩增带。由于在近等基因系中，除了与抗性相关的基因区外，其它的遗传背景是相同的，因此可以认为这些特异带与小菜蛾对溴氰菊酯的抗性有关。     

Mariner转座子与小菜蛾抗性关系的研究

以抗溴氰菊酯、杀虫双、杀螟丹小菜蛾种群及其敏感品系为研究对象,借助聚合酶链式反应(PCR)、载体筛选、琼脂糖凝胶电泳等实验技术,检测了小菜蛾4个品系的Mariner转座子的存在及其与抗性的关系。结果表明,在抗溴氰菊酯、杀虫双、杀螟丹以及敏感品系的小菜蛾中都存在两种大约500 bp的Mariner转座子片断,初次证明在小菜蛾4个品系中均含有两种Mariner转座子,并发现一种新的转座子基因片断,但是没有发现Mariner转座子与抗性之间存在直接的联系。研究结果将为利用Mariner转座子标签法在小菜蛾中分离定位基因、转化外源基因、转基因昆虫防治害虫等研究提供理论基础。     

小菜蛾对杀虫双和溴氰菊酯抗性遗传的RDA分析

利用代表性差异分析技术（Representational Difference Analysis,RDA）初步分析了小菜蛾敏感品系及其抗杀虫双和抗溴氰菊酯近等基因系之间的遗传差异。用敏感品系基因组作驱赶扩增子，分别以抗杀虫双和抗溴氰菊酯近等基因系基因组DNA作检测扩增子，通过4轮消减杂交，在抗杀虫双近等基因系基因组中得到2条差异片段（150bp-300bp），两轮消减杂交后，在抗溴氰菊酯近等基因系中也获得了片段（150bp-300bp）。这些结果表明，RDA技术可有效用于小菜蛾抗性分子机理的研究。     

小菜蛾对溴氰菊酯的抗性消退与抗性恢复动态

利用选育的抗溴氰菊酯小菜蛾 Plutella xylostella L. 品系第100代为虫源,在不接触任何杀虫剂条件下继代繁殖50代,观察了小菜蛾对溴氰菊酯的抗性消退动态;同时对消退过程中的小菜蛾施加溴氰菊酯选择压力和利用消退过程中的小菜蛾与抗性品系、非抗性品系杂交,观察了小菜蛾对溴氰菊酯的抗性恢复动态.结果表明:①小菜蛾对溴氰菊酯的抗性消退表现为1～15代较慢,15～25代较快,25代后又缓慢的趋势,抗性消退也使氯菊酯、氯氰菊酯交互抗性水平下降;②溴氰菊酯抗性消退过程中,当连续受到一定程度的溴氰菊酯选择压力时,抗性会在几代之内很快恢复;③与其它品系杂交的后代受到一定剂量溴氰菊酯连续处理后,3～4代就能达到或接近抗溴氰菊酯品系第100代的抗性水平,对氯菊酯、氯氰菊酯的交互抗性水平也随之迅速上升.     

小菜蛾对杀虫双和杀螟丹抗性的生化遗传分析

在对室内杀虫双和杀螟丹继代选择过程中小菜蛾的抗性发展变化、抗性生化机制、抗性遗传方式和抗性风险评估的基础上,笔者测定了小菜蛾抗杀虫双品系、抗杀螟丹品系和敏感品系及其杂交后代的生物学特性以及蛹的酶活性,通过t值检验酶活性间的差异显著性,从生物统计学和遗传学角度分析酶活性与抗性之间的关系。 1 材料与方法