新孢子虫NcGRA7与NcGRA2串联基因的真核载体构建与体外瞬时表达

本研究为构建新孢子虫NcGRA7与NcGRA2串联基因的真核表达载体,以SOE-PCR技术得到新孢子虫NcGRA7-NcGRA2串联基因,并先克隆到pMD-19T载体上,经测序未发现移码后,再克隆到pDNA3.1载体上,用IFA进行体外瞬时表达的鉴定。结果表明,pDNA3.1-NcGRA7-NcGRA2串联基因的真核表达载体构建成功,在体外真核细胞内能表达外源蛋白。     

猪弓形虫病的实验室诊断与治疗

[目的]对猪场发生弓形虫的病例进行诊断和治疗,并提出防治措施.[方法]通过猪的临床检查、脏器的剖检变化观察、病料的染色镜检和PCR方法对疑似弓形虫病进行诊断.对病猪采用复方磺胺嘧啶钠治疗,对全群猪口服磺胺脒预防.[结果]通过病猪的临床症状、剖检变化确定为弓形虫病,染色镜检能观察到虫体,通过PCR扩增出病猪脏器中弓形虫的特性条带.[结论]复方磺胺嘧啶钠能控制该猪场弓形虫病的病情.     

新孢子虫NcGRA2基因真核表达质粒的构建及其在293细胞内的表达

[目的]为了构建新孢子虫NcGRA2基因的真核表达载体,探讨重组载体在体外细胞的表达.[方法]从含有NcGRA2基因的重组质粒pGEX-4T1-NcGRA2中,用限制性内切酶进行酶切获得带有粘性末端的NcGRA2基因片段.经琼脂糖凝胶电泳切胶回收NcGRA2基因片段,与pcDNA3.1载体连接.将构建的真核表达质粒pcDNA3.1-NcGRA2转染到293细胞中表达.[结果]经酶切分析和序列测定,证实了重组质粒的正确连接.经免疫荧光抗体试验验证pcDNA3.1-NcGRA2能在293细胞中表达NcGRA2蛋白.[结论]获得重组质粒pcDNA3.1-NcGRA2,并能在体外细胞中表达NcGRA2蛋白,为进一步研究核酸疫苗的动物免疫试验奠定了基础.     

樟子松人工林冠下植物种类动态变化因子分析

本文对林分下层植物种类组成和林分内光照与林冠叶量的变化进行了研究 ,结果表明 :樟子松人工林林下生态类型划分为A、B、C三个类型 ,其营养条件排序A 相似文献   

牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因的克隆与序列分析

为分析吉林省流行的牛瑟氏泰勒虫基因序列，根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因序列设计合成一对引物，用PCR方法扩增出牛瑟氏泰勒虫的基因片段，并成功地将该基因纯化后克隆到pGEM-TEasy载体上，将经EcoRⅠ酶切鉴定和PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序。结果表明克隆的基因片段长度为868bp，编码283个氨基酸，有2个潜在的糖基化位点。核苷酸同源性分析表明，该基因片段与韩国株（AF521557）、日本株（AB016280）、俄罗斯株（AB016279）的核苷酸序列同源性分别为99．4％、88.0％、88．1％。     

图书馆如何充分发挥在构建和谐社会中的作用

通过对图书馆如何充分发挥在构建和谐社会中作用的研究,即提升图书馆的服务理念、创新图书馆的管理模式、丰富图书馆的服务内容、加强对图书馆的支持力度4个方面的研究,促使图书馆工作更能体现时代的特征,增添图书馆服务于和谐社会的内涵.     

吉林省龙井市牛东方泰勒虫的流行病学调查

牛东方泰勒虫病是由泰勒科、泰勒属的东方泰勒虫寄生在牛的红细胞及淋巴细胞中,从而引起的一种具有传播性的血液原虫病,以高烧、贫血、出血、异常消瘦以及体表淋巴结肿大等症状为主要临床特征。为了掌握牛东方泰勒虫病在吉林省龙井市地区的流行情况,本试验采用血涂片染色镜检与PCR检测相结合的方法对该地域的牛血液样本进行牛东方泰勒虫病的流行病学调查,并利用等位特异型引物对该病进行分型。试验结果表明,龙井地区牛东方泰勒虫PCR检测样本阳性率为32.08%(17/53),C-型的阳性率和I-型的阳性率均为13.21%(7/53),而B-型仅为7.55%(4/53),且存在两种基因型的混合感染,B型和I型混合感染率为1.87%(1/53),B型和C型混合感染率1.87%(1/53)。     

新孢子虫NcGRA2t基因的克隆与生物信息学分析

为研究新孢子虫的血清学诊断方法,参照GenBank中已发表的新孢子虫NcGRA2基因序列设计了1对特异引物,扩增去掉新孢子虫NcGRA2基因N-末端信号肽的基因（NcGRA2t）。根据NcGRA2t蛋白基因序列和推导的氨基酸序列进行同源性和抗原决定簇分析。结果表明,扩增得到的NcGRA2t基因与Nc-1株同源性为100％,与弓形虫的同源性为49％,NcGRA2t氨基酸有很强抗原性。     

弓形虫重组GRA3抗原单克隆抗体的制备与鉴定

为了鉴定弓形虫特异性重组GRA3蛋白的抗原表位,以原核表达并纯化的融合蛋白GRA3免疫BALB/c小鼠,利用快速免疫法进行免疫,通过ELISA进行筛选,获得8株能够稳定分泌抗GRA3蛋白特异性单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞。这8株McAbs亚类鉴定均为IgG型,特异性强,ELISA检测结果均为阳性,抗体效价均大于1∶200 000。该结果为进一步探索GRA3蛋白的结构和功能以及建立诊断方法奠定了基础。所生产的McAb可用于免疫组化和疫苗的制备,并可大大提高诊断的特异性。     

新孢子虫致密颗粒蛋白截短型NcGRA7t的体外表达及免疫活性检测

为构建新孢子虫致密颗粒截短型NcGRA7t基因的原核表达质粒,研究其在体外细胞中的表达情况和免疫活性,运用PCR方法和基因克隆技术,构建了pGEX-4T3-NcGRA7t重组质粒,并在大肠杆菌中进行诱导蛋白表达,用SDS-PAGE和Western blot检测重组蛋白在体外的表达情况和免疫活性。结果显示:以新孢子虫的cDNA为模板,从新孢子虫Nc-1株扩增出了NcGRA7t基因,并克隆到了表达载体上。本试验成功构建了重组表达质粒pGEX-4T3-NcGRA7t,表达出的NcGRA7t重组蛋白具有免疫活性,为新孢子虫病的流行病学调查和亚单位疫苗的研究奠定了基础。