拟南芥核酸酶基因AtCaN2克隆及功能分析

为了研究拟南芥核酸酶AtCaN2基因在植物生长发育过程中的作用与功能,从拟南芥中克隆了核酸酶AtCaN2基因,并对该基因进行生物信息学分析,亚细胞定位分析,蛋白质诱导、表达、纯化及功能研究。结果表明,AtCaN2蛋白等电点为8.45,化学式为C_(1116)H_(1788)N_(310)O_(335)S_3,共含有3 552个原子数,为亲水性蛋白;AtCaN2与十字花科亚麻荠的同源性较高,同源性为87.89%,与谷子、高粱和玉米的同源性较低,同源性分别是56.42%,57.35%,56.47%,且在氨基酸序列中间具有高度保守的D-X-D序列;同时进化树分析显示AtCaN2与十字花科亚麻荠的亲缘性最近,与谷子、玉米等禾本科植物的亲缘性比较远,这些结果同氨基酸序列比对的结果一致;亚细胞定位结果显示其定位于细胞质,与预测结果相符;蛋白质诱导和纯化得到大小约为35 ku的His-AtCaN2融合蛋白;Western Blot分析显示,诱导表达的融合蛋白正确翻译表达,且没有出现结构上的断裂或者降解的情况;小量诱导和大量诱导均有点突变后的His-AtCaN2(M)融合蛋白表达,且纯化后得到了点突变His-AtCaN2(M)较单一的条带;蛋白酶活性分析表明,His-AtCaN2融合蛋白对核酸底物具有降解能力,表现出较高的活性,而His-AtCaN2(M)点突变融合蛋白对核酸底物没有降解能力,底物基本上未降解。研究结果可以为下一步在植物体内研究AtCaN2基因的相关机理作用提供基础。     

高黄酮含量野葛淀粉提取工艺优化

采用单因子和正交试验方法对富含黄酮的野葛(Pueraria lobata)淀粉提取工艺进行了研究,对水、甲醇、乙醇3种溶剂提取效果进行了比较,以淀粉中的总黄酮含量为参考指标,分别对4个提取参数(提取温度、乙醇体积分数、提取时间、固液比)进行单因子试验,然后采用正交试验对提取条件进行优化。结果表明,野葛淀粉高黄酮含量提取的工艺条件为提取温度35℃、乙醇体积分数50%、提取时间3.0 h、固液比1∶8(kg∶L)。     

药食两用植物富硒研究进展

硒元素作为人体必需的微量元素之一,具有抗氧化、抗衰老、提高人体免疫力等预防保健作用,富硒产品越来越受到人们的欢迎。培育富硒药食两用植物,对深入开发富硒功能性食品,对人们的营养和保健具有重要意义。系统介绍了药食两用植物富硒研究的现状,指出其存在的问题与不足,并做出了展望。     

马蹄大黄栽培技术要领

近几年马蹄大黄价格彪升,种植面积猛增,但新发展区马蹄大黄生长差异显著、产量不够理想。经过实地考察调研发现,主要原因是种植管理技术参差不齐,导致马蹄大黄产业发展的不整齐。本文以马蹄大黄的生物学特性为切入点,就马蹄大黄栽培过程中选地整地、选种、移栽、中耕除草、追肥、病虫害等田间管理应注意的事情进行了详细的归纳与总结,为湖北恩施大黄产业发展提供技术支撑。     

拟南芥半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因AtCYS6克隆及功能分析

为了研究拟南芥半胱氨酸蛋白酶抑制剂AtCYS6基因在植物生长发育过程中的作用与功能,从拟南芥中克隆了半胱氨酸蛋白酶抑制剂AtCYS6基因,并对该基因进行生物信息学分析,亚细胞定位分析,蛋白质诱导、表达、纯化及功能研究。结果表明,AtCYS6蛋白等电点为5.85,化学式为C_(1179)H_(1848)N_(322)O_(348)S_6,共含有3 703个原子数,为亲水性蛋白;AtCYS6与十字花科的荠菜、荠蓝的同源性较高,同源性分别为81.1%,80.3%,同水稻、玉米和大豆的同源性较低,同源性分别为55.5%,54.3%,56.6%,且在氨基酸序列中间具有高度保守的Q-V-G(Gln-Val-Gly)序列;同时进化树分析显示AtCYS6与同属于十字花科的荠菜、荠蓝的亲缘性较近,同水稻、玉米、高粱、谷子等禾本科植物的亲缘性较远;亚细胞定位结果显示其定位于细胞质,与预测结果相符合;蛋白质诱导、表达和纯化得到大小约为52 ku的融合蛋白,其中AtCYS6蛋白质的分子量约为26 ku,与预测值相符合;Western Blot分析显示,诱导表达的融合蛋白正确翻译表达,且没有出现结构上的断裂或者降解的情况;蛋白酶活性分析表明,AtCYS6对木瓜蛋白酶具有抑制作用。研究结果可以为下一步在植物体内研究该基因的相关机理作用提供基础。     

拟南芥AtCYS6基因酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定

为了筛选与拟南芥半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因AtCYS6相互作用的蛋白,构建其酵母双杂交诱饵表达载体。本研究利用PCR方法扩增得到拟南芥AtCYS6的基因片段,与诱饵载体pGBKT7连接构建诱饵表达载体,经双酶切以及测序检测验证重组载体构建成功后,通过醋酸锂法将诱饵表达载体pGBKT7-AtCYS6与空载体pGBKT7分别转化到Y2HGold酵母菌株,检测其是否有自激活能力以及对宿主酵母菌株是否有毒性作用。结果表明:经PCR扩增后得到了AtCYS6基因,成功构建了无自激活和没有毒性的诱饵表达载体pGBKT7-AtCYS6。本研究结果可进一步为筛选与AtCYS6相互作用的蛋白质及功能研究提供科学依据。     

贝母属植物生物碱累积研究进展

系统阐述了贝母属植物生物碱分类以及不同药用部位、不同生长年限、不同生长环境对生物碱累积的影响,并从规范化种植技术、加强贝母属植物生理生态基础研究、喷施外源植物生长调节剂等方面对提高生物碱含量的途径进行了叙述,以期为贝母属药用植物资源的可持续利用及规范化种植提供参考。     

野葛钙离子依赖性核酸酶PlCaN基因克隆和生物信息学分析

拟克隆野葛钙离子依赖性核酸酶PlCaN基因全长cDNA序列,并对其进行生物信息学分析,同时构建其原核表达载体。提取野葛材料总RNA作为模板,利用逆转录PCR(RT-PCR)、cDNA末端快速扩增技术(rapidamplification of cDNA ends,简称RACE)等方法获取野葛PlCaN的cDNA全长序列,利用相关软件和在线网站进行生物信息学分析,构建原核表达载体p BRT7-PlCaN并鉴定。结果表明,PlCaN的cDNA全长1 008 bp,编码335个氨基酸,预测蛋白质相对分子质量为37.3 ku,理论等电点(pI)为9.4,为亲水性蛋白,无信号肽,表明原核表达载体p BRT7-PlCaN构建成功,为探究其在不同组织中的表达情况,建立原核表达体系,并为后期PlCaN的功能研究提供理论基础。     

活化造血-免疫细胞回输对高剂量化疗恶性肿瘤患者的免疫保护作用

目的:探讨活化的造血-免疫细胞回输对高剂量化疗患者的免疫保护作用.方法:经过3～6个疗程的常规化疗或常规放疗未完全缓解或缓解后复发的恶性肿瘤26例,随机分为造血-免疫细胞活化组(简称活化组)16例和未活化组10例.活化组患者化疗前用GM-CSF动员5 d后,从外周血分离出单个核细胞,用GM-CSF、抗肿瘤-抗T细胞双功能抗体、IL-2在体外活化和扩增粒系祖细胞和免疫细胞,在亚去髓性化疗后回输给患者.结果:(1)与未活化组相比,活化组患者的中性粒细胞绝对数(ANC)从＜0.1×109/L升至＞0.5×109/L的时间缩短6.1 d;(2)体外培养CFU-GM增加9.8倍,有核细胞数增加3.4倍;(3)T淋巴细胞对抵抗NK活性的肺癌细胞株PC 84045的杀伤率从10%提高至55%,对K 562细胞杀伤率从28%提高至46%.结论:用活化的造血-免疫细胞回输能加快高剂量化疗后造血和免疫功能的重建.