微小隐孢子虫TSP3蛋白的定位分析

通过对微小隐孢子虫TSP3氨基酸序列进行生物信息学分析设计多肽片段,偶联KLH载体蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA方法检测血清效价并利用特异性亲和层析的方法纯化抗体。以该抗体作为一抗,利用Western blot检测虫体天然蛋白质在体内的表达情况,通过间接免疫荧光方法进行亚细胞定位分析。结果表明:制备的多克隆抗体能够特异性识别虫体天然蛋白,亚细胞定位发现其位于子孢子以及裂殖子的顶端。     

长春地区宠物犬贾第虫感染的分子流行病学调查与感染虫株的TPI基因分型

贾第虫是一种人兽共患性寄生原虫,可在全世界范围内传播,并且有人—人,人—动物,以及动物特异性的传播循环,且其流行率与地理环境以及不同的区域有关。采用分子生物学分析方法,确定长春地区的宠物犬患有贾第虫的患病率以及基因型来评估犬贾第虫向人传播的危险。调查结果显示:宠物犬的贾第虫流行率为10.46%(25/239)。通过磷酸丙糖异构酶(TPI)基因的多态性对所分离虫株的基因型进行鉴定,结果显示所有贾第虫的基因型均为犬特异性的C型,未发现人兽共患的A型和B型。基因亚型结果显示在所有的样本中以CⅠ为主要亚型,占全部样本的76.00%(19/25)。此结果显示出贾第虫由犬传播给人的风险很低,这与以往来自中国南方的调查结果明显不同。     

微小隐孢子虫Ⅰ型跨膜蛋白Cgd7_4560的亚细胞定位及其对HCT-8细胞的黏附特性

型跨膜蛋白在顶复门寄生虫入侵宿主细胞过程中发挥重要作用。试验对微小隐孢子虫Ⅰ型跨膜蛋白Cgd7_4560进行生物信息学分析,选取抗原性强的序列,采用PCR方法扩增出微小隐孢子虫DNA Cgd7_4560部分基因。将该片段分别连接到p ET-28a和p GEX-4T-1载体,构建重组表达质粒p ET-28a-Cgd7_4560和p GEX-Cgd7_4560,并将其转化到大肠埃希氏杆菌BL21 (Condon plus),IPTG诱导表达获得重组蛋白。SDSPAGE和Western blot分析,His标签重组蛋白为31 ku,GST标签重组蛋白为53 ku。用His标签重组蛋白免疫家兔,间接ELISA方法检测血清抗体效价达到1∶16 000,成功制备多克隆抗体。采用Western blot方法验证该抗体能够特异性的识别虫体天然蛋白,间接免疫荧光分析该蛋白在子孢子头端,间接ELISA结果表明GSTCgd7_4560能与HCT-8细胞黏附,为其功能研究奠定了基础。