MDR1基因shRNA真核表达质粒的构建

为了构建靶向MDR1基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达重组质粒,试验针对MDR1基因序列选取3个干涉靶点,设计合成3条编码shRNA的DNA模板,分别定向克隆到真核表达质粒pSilencer 3.1-H1中构建重组质粒,再进行菌落PCR扩增和测序鉴定。结果表明:菌落PCR扩增得到与预期大小相同的阳性带,经DNA测序证实插入片段完全符合设计要求,序列无突变。说明成功构建了3个靶向MDR1基因的真核表达重组质粒pSilencer 3.1-H1 shRNA。     

鹌鹑的行为与生态习性

采食行为与规律鹌鹑的采食是啄食,全天各次采食量是不均匀的。统计各次日粮消耗量可见上午比下午多而晚间5—7时为全天的采食高峰。雄鹑各次采食量比较均匀而高峰也在晚间。对于当天没蛋的鹌鹑上下午采食量相差不多,晚间也最多,当日有蛋的鹌鹑上午吃些料而下午特别在产蛋前2小时基本不吃或吃的很少,即使吃料也是慢慢腾腾吃两口就离开食槽。从屠宰当天有蛋或将要产蛋的鹌鹑统计:80%嗉囊很少存有食物。鹌鹑每次采食时总具有一种“新鲜感”,每次喂饲次总是     

猪传染性胃肠炎病毒S基因B和C抗原位点片段在多表达系统中的表达及初步应用

本研究分别用巴斯德毕赤酵母、杆状病毒和大肠杆菌表达系统中表达的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)TH-98株纤突蛋白(S)基因5'端含有B和C抗原位点的片段,利用Dot-ELISA方法对表达蛋白进行了抗原性比较分析,初步建立了以巴斯德毕赤酵母系统表达的重组蛋白为包被抗原的TGEV Dot-ELISA检测方法。结果表明:两种真核系统中表达的重组蛋白的抗原性相对更强。抗原最佳包被量为50 ng,抗体稀释度1∶100,最适封闭液为10 mg/L牛血清白蛋白,血清反应时间为60 min;酶标二抗的工作浓度为1∶1 000,反应时间为30 min,底物在室温显色时间为5 min。本研究建立的Dot-ELISA方法对猪呼吸道冠状病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒和猪流行性腹泻病毒阳性血清的检测结果均为阴性,特异性良好。与Svanova TGEV/PRCV抗体诊断试剂盒比较,此方法的特异性和符合率分别为90%和87%。     

生物学英才班培养模式的探索与实践

为深入贯彻落实《黑龙江省中长期教育改革和发展规划》和《高教强省规划》等文件精神,发挥省重点专业、特色专业的示范和带头作用,提高人才培养质量和服务社会的能力,提升专业建设的总体水平,齐齐哈尔大学生命科学与农林学院2010年率先在生物科学等4个专业开设了英才班,其主要目的是深化教育教学改革,强化人才培养的专业特色,提高学生的自身素质和专业技能,不断探索培养学习型、研究型、创新型高级复合型人才的具体实践。     

饥饿对麻雀体内纤维素酶活性的影响

[目的]探讨饥饿对麻雀体内纤维素酶活性的影响。[方法]采用DNS法,测定自由进食和饥饿组麻雀体内纤维素酶活性的变化,并研究了pH和温度对纤维素酶活的影响。[结果]随着饥饿时间的延长,麻雀胃和肠道内CMC酶活先迅速下降后有部分上升,但未达到对照组的水平。饥饿组BG酶的活性持续下降。肌胃、腺胃、前肠、后肠和直肠中CMC酶活的最适pH分别为3、4、4、6和5。肌胃、腺胃、后肠和直肠的最适温度均为50℃,前肠的最适温度为40℃。BG酶活的最适pH均为4,最适温度为40℃。[结论]饥饿使麻雀消化道内CMC酶活先下降后上升,BG酶的活性持续下降。     

饥饿条件下麻雀体内糖原含量和基础代谢率的变化

糖原是动物体内重要的能源物质.以树麻雀(Passer montanus)为研究对象,将麻雀分为对照组、饥饿驯化1、2、3、4d组(分别禁食1、2、3、4d),驯化后,对试验动物的体重、体脂含量、基础代谢率及主要器官重量进行测定,用硫酸-蒽酮法测定肝糖原和肌糖原的含量.结果表明:肝糖原含量高于肌糖原含量,饥饿驯化使麻雀体内肝糖原和肌糖原含量极显著下降;体重及主要器官重量显著降低.     

miR-423-5p在牛肌肉组织中表达及其靶基因预测

miR-423-5p在细胞中具有重要的生物学功能,如在肌细胞中能影响细胞的增殖。根据miRBase及NCBI网站显示的相关信息利用分析软件对miR-423在各物种之间的同源性进行了分析。取成年西门塔尔牛体内的骨骼肌、小肠、心脏组织利用茎环荧光定量PCR进行miR-423-5p表达量检测,将牛骨骼肌卫星细胞(MDSCs)分化处理不同时长后进行检测;最后通过在线软件(TargetScan、PicTar)预测其可能结合的靶基因。结果表明,miR-423-5p在各物种间具有较高的同源性,在骨骼肌中表达量明显高于其他组织。在MDSCs中,随着细胞分化时间的延长,miR-423-5p表达量逐渐升高。miR-423-5p在12个基因mRNA的3'-UTR上含有潜在的结合位点,其中部分靶基因参与细胞的增殖、分化和凋亡。结果提示,miR-423-5p可能参与细胞的生长代谢,调节细胞的增殖与分化。     

红平菇HP1漆酶基因及启动子克隆和序列分析

以优化后的漆酶培养基为基础,将RT-PCR、RACE技术相结合,从红平菇菌株中获得漆酶基因cDNA全长及Genomic DNA全长序列,Genomic DNA大小为2 344 bp。通过对漆酶基因cDNA全长和Genomic DNA全长序列的比较,结果显示该基因包含13个外显子和12个内含子。基因cDNA全长为1 746 bp,其中包含1个完整的ORF,长度为1 590 bp,编码529个氨基酸。序列在氨基酸水平上与桃红侧耳Pleurotus salmoneostramineus的氨基酸序列具有较高的同源性,相似性达97%,与齿耳菌Steccherinum murashkinskyi漆酶氨基酸序列相似性达到72%。通过SEFA-PCR的方法,扩增得到漆酶基因起始密码子上游长1 126 bp的启动子序列。分析表明,该启动子区域上除分布有TATA-box、CAAT-box、AP2等基本的转录起始元件外,还存在多个潜在的顺式作用元件序列位点,包括4个MRE元件、2个CreA热击元件、2个STRE元件、1个NIT2元件、1个HSEs元件、1个XRE异生物质反应元件、4个氮因子结合位点等。不同外源诱导物可以调节红平菇HP1漆酶基因的表达。