羊口疮LAMP诊断方法的建立及其初步应用

根据GenBank中的羊口疮B2L基因序列,设计合成2对引物,通过对环介导等温扩增条件的优化,敏感性、特异性试验,成功建立了羊口疮LAMP诊断方法.敏感性结果显示,建立的LAMP诊断方法最低核酸检测量为0.50pg/L,而PCR诊断方法最低核酸检测量为50pg/L,特异性结果显示,羊大肠杆菌、羊沙门氏菌、口蹄疫病毒、山羊痘病毒的扩增结果均为阴性.对195份自然感染病羊样品的检测结果表明,该LAMP方法检测结果与PCR检测结果符合率为96.4％.整个扩增反应可在30min内完成,结果肉眼可见,为羊口疮的现场快速诊断提供了一种简便快速的方法,从而满足基层现场快速检疫需要.     

农村集约化肉鸡场卫生管理与疾病控制技术

农村集约化肉鸡场是一个集多家养殖农户为一体的相对松散的集体协会组织，目前在我州农村较为普遍。具有设施简陋、管理不规范、饲养密度大、鸡群周转快、运行效益高、四季频密生产、产品批量均衡上市等特点。在给养殖农户带来较高投资回报的同时，也给卫生管理与疾病控制带来压力，极易造成较大的发病率和死亡率。     

治疗猪腹泻的探讨

引起猪腹泻的原因较多,其主要症状以粥样便、水样便为特征,后期出现不同程度的脱水和微循环障碍,甚者因心衰或休克而导致死亡。本文所说的,主要是常见的普通的猪胃肠卡他和肠炎以及传染性胃肠炎引起的腹泻。该病春秋两季多发,尤其冬末春初和秋末冬初,不分大小、性别、品种,在临床中比较常见。笔者就在兴义县桔山乡搞“成套养猪技术”承包两年(1986年——1987年)来所诊治病例统计,该病在常发病中占50%,且就治疗方面初     

贵州省黔西南州牲畜炭疽流行情况和防制对策

为了掌握全州1994-2004年炭疽流行情况。2003年以来，笔者通过查阅历史档案和疫情资料。并开展访谈、现场调查等形式和实验室检验。将有关资料介绍如下。     

2株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒分子特征分析

为进一步掌握黔西南州猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）流行变异趋势,对2株高致病性PRRSV（HR-PRRSV）贵州分离株GZLPS、GZSB进行Nsp2与GP5基因克隆和测序,并分析毒株分子变异特征。结果显示,2株分离株Nsp2基因有90个核苷酸不连续缺失,不同位置的36个核苷酸发生突变;GP5基因存在不同位点置换。同源性比对与系统进化树分析显示,2株分离株Nsp2与GP5基因与HP-PRRSV JXA1株及贵州省2011年以前流行毒株的核苷酸同源性在96%以上,氨基酸同源性在95%以上,但在分子变异上存在差异。结果表明黔西南州PRRSV变异方式已呈多样性。     

贵州省黔西南州山羊痘的血清学调查

为调查黔西南州山羊痘的隐性感染率和使用疫苗后血清抗体水平,采用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）对黔西南州规模化养羊场和农村散养户共762头份羊血清样本进行了GPV抗体水平检测.结果,未免疫羊群GPV的血清抗体阳性率为14.15％;而在免疫羊群GPV的血清抗体阳性率为79.96％;这表明GPV的免疫效果比较理想,但未免疫羊群存在GPV感染,应引起重视.     

绵羊肺炎支原体热休克蛋白Hsp70 C末端基因原核表达

为研究绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)热休克蛋白Hsp70抗原特性,以Mo贵州分离株为模板扩增得到Hsp70蛋白C末端基因,将目的基因连接至pET-28a原核表达载体,经PCR、双酶切和序列测定正确的阳性重组质粒转化E.coli Rosseta表达菌,IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE及Western blotting分析。结果显示,经PCR从Mo贵州分离株扩增获得567bp的C末端片段,并成功构建含Mo Hsp70蛋白C末端基因的原核表达质粒,经IPTG诱导表达获得分子质量约为27ku的目的蛋白,且目的蛋白能与Mo阳性血清印迹反应。说明,成功构建可有效表达Mo贵州分离株Hsp70蛋白C末端基因的原核表达载体。     

家蝇体内猪繁殖与呼吸综合征病毒的初步分离与鉴定

为调查养猪场环境中家蝇携带猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)情况,2010年采集贵州某猪场家蝇样本,采用RT-PCR方法筛选阳性样本,接种Marc-145细胞分离培养病毒,对分离获得的家蝇样本的PRRSV Nsp2基因进行克隆和序列分析。针对PRRSV N基因家蝇样本扩增出377 bp的特异性片段,阳性家蝇样本接种的Marc-145细胞出现明显CPE现象,针对PRRSV Nsp2基因细胞培养物扩增出1064 bp的特异性片段,测序结果显示,家蝇样本的细胞培养物的PRRSV Nsp2基因片段与贵州猪场猪源PRRSV流行株相比具有较高的核苷酸同源性,高达97.1%~98.5%。从而初步推断家蝇也可能成为PRRSV携带者。     

猪群高热症的血清流行病学调查研究

采用血清学试验对贵阳市花溪区某种猪场的95份血清样本进行猪繁殖障碍性疫病血清学检测,以了解猪群免疫水平及疫病感染状况.结果显示,猪群O型口蹄疫（O-FMD）、猪瘟（HC）、猪繁殖与呼吸障碍综合征（PRRS）、猪伪狂犬病（PR）免疫合格率分别为100％ （33/33）、62.9％（39/62）、14.5％ （9/62）、61.3％ （38/62）,HC、PRRS和PR免疫合格率均未达到农业部要求;通过比较母猪免疫抗体与仔猪母源抗体水平相关性,发现HC与PR首免后抗体保护期维持较短,PRRS免疫不合格;猪群猪圆环病毒病（PC）、猪细小病毒病（PP）隐性感染抗体阳性率分别为70.5％ （67/95）、82.1％（78/95）,隐性感染情况严重.血清流行病学调查结果表明,该猪场应改进HC、PR免疫程序,立即对全群进行PRRS补免,并要高度重视PC和PP的防控。     

种畜禽调运疫病风险评估模型的建立

近年来,随着国家在西部大开发中各项标准化优质畜禽养殖项目的不断立项和实施,各地种畜禽调运越加频繁,疫病传播的风险也越来越大。在种畜禽调运过程中,多数养殖场主由于专业知识缺乏,虽有防疫意识,但往往抓不住防疫的关键环节,更缺乏疫病发生风险评估的有效手段,不断引进新疫病或外源性疫病,