猪繁殖与呼吸综合征病毒GP3/GP5/M真核表达载体的构建及其体液免疫应答

本试验旨在构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP3、GP5和M蛋白的真核重组质粒。以PRRSV LN株为模板,采用PCR方法扩增出GP3、GP5、M基因片段,将扩增的GP5、M通过Linker序列串联成GP5-M,然后将GP3与GP5-M双酶切后插入pcDNA3.1(+)构建重组质粒pcDNA3.1-GP3-GP5-M,将其转染COS7细胞。PCR鉴定表明重组质粒pcDNA3.1-GP3-GP5-M含有PRRSV GP3、GP5-M基因,间接免疫荧光检测表明GP3、GP5-M蛋白在COS7细胞内获得表达。Western blotting检测证实GP3、GP5、M蛋白获得正确表达,并且所表达的GP3、GP5、M蛋白是融合蛋白。将pcDNA3.1-GP3-GP5-M免疫BALB/c小鼠,首免后2周可检测到特异性PRRSV中和抗体,首免后8周中和抗体效价最高可达1∶32。进一步将pcDNA3.1-GP3-GP5-M免疫断奶仔猪,首免后4周即可产生1∶4～1∶8的中和抗体。本试验成功构建了表达PRRSV GP3、GP5和M融合蛋白的真核重组质粒pcDNA3.1-GP3-GP5-M,中和抗体检测表明pcDNA3.1-GP3-GP5-M具有良好的免疫原性,从而为PRRSV基因工程疫苗的研制奠定基础。     

幼犬腹泻综合症的防治

随着物质文化生活条件的提高，城市居民养犬者越来越多，犬病也不断发生，了解城市宠物犬生活规律及其疾病发生特点，有助于犬病的防治，确保人畜健康，一般来说，犬得病是由于饲养管理方法不当等原因造成的，且往往治疗腹泻的费用占医疗费的50％，因此，有必要格外重视。     

一例雏鸡传染性喉气管炎的诊治

鸡传染性喉气管炎是由疱疹病毒引起的鸡的一种急性呼吸道传染病。其特征是呼吸困难、咳嗽和咳出含有血液的渗出物。喉部和气管粘膜肿胀,出血并形成糜烂。本病传播快,死亡率高,主要是侵害于鸡,虽然各种年龄的鸡均可感染,但多以成年鸡为特征,而雏鸡感染本病比较少见。     

口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因重组杆状病毒的构建与表达

通过设计特异引物,扩增获得口蹄疫病毒3ABC编码区的目的基因片段,将其用SalI和NcoI双酶切后,与经同样处理的带有一段信号肽序列的穿梭质粒pMelBac-B连接,经筛选、鉴定及DNA序列分析后,获得重组质粒pMel-3ABC.将重组质粒与线性化的杆状病毒骨架Bac-N-Blue共转染Sf9昆虫细胞,通过噬斑筛选和PCR鉴定,获得了含有目的基因的重组杆状病毒.用重组病毒感染Sf9昆虫细胞,通过间接ELISA方法,检测细胞培养基上清液中表达的口蹄疫病毒抗原.结果表明,口蹄疫病毒基因片段3ABC正确克隆到杆状病毒载体上,重组病毒可在昆虫细胞中表达目的蛋白.     

测定牛奶中铅含量的两种前处理方法比较分析

牛奶样品经微波消解、压力罐消解两种前处理方法处理后,用石墨炉原子吸收光谱法检测铅含量。结果表明,两种前处理方法的测定结果没有显著性差异,都能较好地满足牛奶中铅含量的检测。但微波消解处理样品过程省时,操作相对简单、安全,重现性好,回收率高,可作为检测牛奶铅含量的首选前处理方法。     

口蹄疫病毒非结构蛋白3AB基因的可溶性表达与反应原性的鉴定

设计特异性引物扩增得到完整的口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白(NSP)3AB基因,定向克隆到表达载体pET-30a中,获得了重组质粒pET-3AB,并转化大肠杆菌(Eschenchia coli)BL21(DE3).重组菌分别在37℃和28℃条件下诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳鉴定,观察到37℃培养条件下目的蛋白形成包涵体,在28℃条件下培养目的蛋白以可溶性的形式表达.Western blot分析表明,表达的目的蛋白能与FMDV感染牛血清发生特异性反应.以纯化的3AB蛋白作为抗原,采用间接ELISA模式检测了部分FMDV感染动物血清和健康动物血清,证明表达蛋白与FMDV感染血清有很好的反应而与健康动物血清无反应.     

饲料中动物源性成分检测技术的研究进展

动物源性成分检测的结果不仅可以预防疯牛病等人畜共患病的传播,同时可用于兽医学的研究。文章对饲料中动物源性成分检测技术类型和研究现状进行分类论述,讨论各种方法的优势与局限性及其发展趋势,以期为动物源性饲料的质量安全监管提供参考。     

应用Dot-ELISA试验快速检测成品饲料中的沙门氏菌

沙门氏菌是最常见的一种人兽共患性病原菌，它型别繁多，Bergey＇s系统细菌学手册（1984）记载有2022个血清型，WHO沙门氏菌研究和咨询协作中心报告至1987年底已有2213个血清型，目前国际沙门氏菌中心实验室报告沙门氏菌约有255个菌型及变异型。East Anglia大学的研究表明：沙门氏菌感染的发生不仅是在商店或厨房里，     

基于标签制度的药物饲料添加剂使用情况调查

为了解药物饲料添加剂的使用现状,分析其中存在的问题,便于加强监管,随机抽取30家饲料企业的102批加入金霉素的饲料标签及样品对其进行判定和检测。结果发现少数饲料标签内容不规范,标签中药物饲料添加剂的标示值与实测值不符。通过分析这些问题产生的原因,提出了相应的对策建议。     

减毒沙门氏菌作为口服活疫苗载体的研究进展

文章就沙门氏菌相关基因的特点、减毒沙门氏菌载体激发的免疫应答、进入机体免疫系统的机制、减毒沙门氏菌的应用、载体疫苗的优越性及潜在危险性几方面综述了减毒沙门氏菌作为口服疫苗载体的研究进展,为新型菌苗的研制提供一种新的思路。