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试验旨在筛选坏死梭杆菌(Fusobacterium necrophorum,Fn)外膜蛋白(outer membrane protein,Omp)中的候选抗原蛋白,为Fn的亚单位疫苗研究奠定基础。采用Uniprot对Fn Omp序列进行预测,基于预测结果筛选拟表达蛋白,并根据GenBank中登录的Fn Omp相应基因序列设计特异性引物,以QL03株为模板进行PCR扩增、原核表达,以及SDS-PAGE和Western blotting分析,并通过血清杀菌试验和小鼠免疫攻毒保护试验,鉴定重组蛋白的免疫原性,筛选最佳候选蛋白。结果显示,预测得到121个蛋白,顺次命名为1-Fn~121-Fn,根据预测结果筛选出8-Fn、11-Fn、41-Fn、95-Fn和102-Fn 5个候选蛋白,其PCR扩增产物大小分别为672、1 164、570、1 059、729bp。SDS-PAGE和Western blotting分析显示,除8-Fn未表达外,其余4个蛋白均成功表达,大小分别为60、39、59、44ku,命名为P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn,均能与Fn阳性血清反应。血清杀菌试验结果显示,4个重组蛋白均有一定杀菌效果,其中抗P102-Fn血清的杀菌效果最佳,杀菌率可达40.49%。小鼠免疫保护试验结果显示,P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn对小鼠均具有一定的保护效果,其中P102-Fn保护效率最高,达60%。结果表明,P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn均具有良好的免疫原性,其中P102-Fn的免疫原性及诱导机体产生保护免疫反应能力最佳,最有望成为Fn亚单位疫苗的候选蛋白。 相似文献
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胶体金技术是一种常见的标记技术,胶体金免疫层析试纸条因具有简便、快速、廉价、易操作、安全、稳定、不需特殊仪器、肉眼即可判断等优点,在动物疫病检测,特别是基层兽医人员以及大批量检测和大面积普查等方面得到了广泛应用,显示出了巨大的发展潜力和广阔的应用前景。本文就胶体金试纸条在猪病快速诊断上的应用现状及发展前景作一简要综述,为我国猪病毒病的诊断与预防控制提供参考,同时对胶体金技术与几种常见检测技术的性能进行了比较,剖析了胶体金技术的优势及发展瓶颈,并对其发展方向进行了展望。 相似文献
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基因C型鸭肝炎病毒的分离和鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
通常将鸭肝炎病毒(duck hepatitis virus, DHV)分为3个血清型.1型(DHV-1)属于小RNA病毒科中为DHV-1成立的一个新属[1-3].2型(DHV-2)已被改称为鸭星状病毒1型(duck astrovirus 1, DAstV-1)[4],对其聚合酶基因部分序列的分析可支持该分类[3,5].虽然3型(DHV-3)仍被ICTV(2005)归属于小RNA病毒科[6],但其聚合酶基因亦具有星状病毒的特点[3,5],因此,不宜再将DHV-2和DHV-3称为DHV的2个血清型. 相似文献
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试验旨在应用宏基因组测序技术探究两种堆肥处理方式下猪粪中微生物的结构组成与分布特征。试验采集同一粪池中的新鲜猪粪,随机分成添加有效微生物(EM)菌的F组和未添加EM菌的K组,每组粪堆各1堆,堆成圆锥形粪堆,粪堆高1.2 m,底部直径2 m;采集堆肥第0、7、14和21天的粪便样本并提取粪便总DNA,运用宏基因组高通量测序技术,比较F组和K组的微生物多样性(组成及结构)差异,并对功能基因进行注释。结果表明,猪粪便中的细菌共测序获得1 083 607个有效开放阅读框(ORFs);共鉴定出147个门、118个纲、258个目、593个科、2 343个属和13 193个种;在门水平上,相对丰度前十的细菌界优势菌门有:变形菌门(Proteobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、放线菌门(Actinobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、疣微菌门(Verrucomicrobia)、绿弯菌门(Chloroflexi)、柔壁菌门(Tenericutes)、浮霉菌门(Planctomycetes)、螺旋体门(Spirochaetes)和酸杆菌门(Acidobacteria);在属水平上,两组平均丰度值排名前三十五的属分别属于变形菌门、拟杆菌门、厚壁菌门、放线菌门和疣微菌门;通过KEGG功能预测分析,新陈代谢通路是最丰富的,氨基酸代谢通路和碳水化合物代谢通路是包含功能基因数量最多的二级通路。两组的菌群结构多样性差异表明添加EM菌后会促进堆肥前期的菌群变化。 相似文献