东乡野生稻苗期耐冷QTL qCTS3.3候选基因LOC_Os03g54970冷胁迫下荧光定量表达分析及克隆

为了验证东乡野生稻苗期耐冷QTL qCTS3.3的功能,结合笔者所在课题组前期完成的转录组分析数据,将落在qCTS3.3 QTL 2个最近侧翼分子标记MK149624和MK137032之间区域的差异表达基因LOC_Os03g54970-DX作为qCTS3.3的候选基因,并通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)对不同低温处理时间长度该基因在东乡野生稻叶片中的表达水平进行了相对定量分析,结果表明,该基因在低温胁迫处理前后表达量呈现出低—高—低—高的变化趋势,随后,参照测序水稻品种日本晴对应的该基因位点的序列信息设计引物,通过RT-PCR技术从东乡野生稻中成功扩增到了LOC_Os03g54970-DX基因的全长cDNA,构建了该基因位点的过表达载体。测序分析结果表明,东乡野生稻中的LOC_Os03g54970-DX基因序列与日本晴中的对应位点序列完全一致,进一步利用农杆菌介导法,将东乡野生稻中的LOC_Os03g54970-DX的过表达载体转入水稻受体品种TP309,最终获得了48株转基因植株,研究结果为下一步研究东乡野生稻LOC_Os03g54970-DX基因位点在冷胁迫作用条件下的功能机制奠定了材料基础。     

水稻膜联蛋白基因OsAnn8干旱和低温条件下表达模式以及CRISPR/Cas9定点编辑

为了阐明水稻膜联蛋白基因家族成员OsAnn8在干旱和低温胁迫条件下的功能作用机制,通过荧光定量PCR技术对不同干旱和低温处理下的水稻叶片中OsAnn8基因进行转录水平上的定量分析,结果表明,OsAnn8基因在干旱胁迫处理前后表达量呈现出高-低-高的变化趋势,而在冷胁迫处理前后表达量则呈现出低-高-低-低的变化。随后,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对OsAnn8基因进行定点编辑,并借助农杆菌介导将OsAnn8基因靶位点的CRISPR/Cas9基因编辑植物表达载体导入转基因受体品种TP309,经潮霉素筛选后共获得32株转基因阳性植株,靶位点扩增测序峰图分析表明其中的2个单株出现了重叠峰,进一步的T载体克隆分别测序表明,这2个单株为单等位基因敲除,说明本研究已经成功获得了OsAnn8基因靶位点敲除的单等位突变体,不同类型的水稻OsAnn8基因突变体的创建,为水稻膜联蛋白基因家族成员OsAnn8在非生物胁迫条件下的功能研究奠定了材料基础。     

稻瘟病菌性别决定基因的研究进展

简要概述了水稻稻瘟病菌的性别决定基因的研究进展,并且对水稻稻瘟病菌的性别决定基因克隆的重要条件及其可能的结构特征进行了分析和探讨。     

生物信息学在基因组学中的应用

随着计算机科学、物理学、数学等与生命科学的相互渗透和交叉,生物信息学愈来愈显示出其重要性,尤其是在抗病基因的研究中。笔者从结构基因组、比较基因组、功能基因组与生物信息学等方面论述了生物信息学在基因组学中的应用。     

东乡野生稻种质资源的抗性研究进展

为了更加深入研究和利用东乡野生稻种质资源,对东乡野生稻种质资源的抗性鉴定(抗病性、抗虫性和抗逆性)、抗性遗传分析、抗性基因分子标记定位及抗性基因同源片段克隆等方面进行综述,展望了东乡野生稻抗性研究和利用的方向.     

二倍体马铃薯野生种高效再生体系的建立

以二倍体马铃薯野生种(Solanum cardiophyllum)的叶片和茎段为材料,进行离体再生体系的研究.结果表明,叶片和茎段愈伤组织最适诱导培养基分别为MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L和MS+6-BA 2.0 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L,平均诱导率分别达93.75%和99.26%;来源于叶和茎段的愈伤组织不定芽分化的最适培养基分别为MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+GA<,3> 2.5 mg/L和MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+GA<,3> 5.0 mg/L,不定芽平均分化率达96.43%和97.25%.生根培养基以MS+NAA 0.3 mg/L效果最好,平均生根率达100%.     

东乡野生稻NBS类抗病基因同源片段的克隆及序列分析

根据已知的NBS-LRR 类抗病基因结构中氨基酸的保守区域,设计简并引物,通过RT-PCR扩增及克隆,从东乡野生稻(Dongxiang Oryza rufipogon Griff.)中共获得7个新的NBS-LRR 类抗病基因同源片段.所有7 个抗病基因同源序列均含有NBS-LRR 类抗病基因的保守序列,如P-loop、...     

影响印楝愈伤组织生长和印楝素累积的因素

研究了培养基细胞分裂素、蔗糖浓度、光照条件对印楝愈伤组织生长和印楝素累积的影响.结果表明,印楝愈伤组织培养以MS 3.0mg/L NAA 1.0 mg/L 6-BA 40 g/L蔗糖为最佳培养基,半光照培养,此时印楝素的累积量达到较高水平.     

平卧菊三七组织培养技术研究

该研究以平卧菊三七的叶片为外植体,对影响其愈伤组织诱导及芽分化的相关因素进行了探讨。结果表明,适合平卧菊三七愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+2,4-D 1mg/L;愈伤组织分化出芽的培养基配方为MS+6-BA 1mg/L+NAA 0.4mg/L。在1/2 MS+NAA 0.2 mg/L+IBA 0.3mg/L的培养基配方上生根较好,移栽到不同基质中的组培苗,存活率达100%。