小麦TaBG的克隆及其在花药开裂中的潜在功能

【目的】β-葡萄糖苷酶（4-β-D-glueosidase,BG）是一种水解酶,可以从糖聚合物或寡聚糖中水解糖苷键释放出非还原性糖基,对控制花药开裂具有重要作用。小麦光温敏雄性不育系BS366在不育环境下花药不开裂,在可育环境下花药开裂或不完全开裂。从BS366中克隆TaBG,分析其在花药开裂中的潜在功能,为进一步解析小麦光温敏雄性不育系花药开裂异常的分子机理提供理论基础。【方法】以不育系BS366花药的cDNA为模板,克隆TaBG;利用生物信息学软件对TaBG及其蛋白结构进行预测,构建系统进化树、预测互作蛋白并对TaBG进行上游启动子元件以及互作miRNA预测;构建TaBG-16318hGFP载体,观察其在小麦原生质体中的亚细胞定位;使用实时荧光定量PCR（qPCR）方法测定TaBG在不育环境、可育环境下不同发育时期花药中的表达量,以及MeJA处理下TaBG及与其互作的tae-miR395a在花药和颖壳中的表达模式。【结果】TaBG属于糖基水解酶超家族基因,全长为1 473 bp,编码490个氨基酸,蛋白理论等电点为8.12,属于不稳定的亲水性蛋白。通过miRNA互作预测,发现TaBG可能受miR169、miR395a等抗逆性相关的miRNA调控。通过蛋白互作预测,发现TaBG可能与氧化还原酶（glucose-methanol-choline oxidoreductase,GMC）、内切葡聚糖酶（endoglucanase,EG）等蛋白互作。TaBG定位于小麦原生质体的液泡中。qPCR结果表明,TaBG在花药发育双室期（stage13)、花药开裂时期（stage14）和衰退期（stage15）中的表达量呈现先升高后下降的趋势。在花药开裂时期表达量最高,并且在不开裂花药中的表达量是正常开裂花药的2.8倍。经MeJA处理后,花药和颖壳中的TaBG均呈下调表达,tae-miR395a表达模式与其相反。【结论】TaBG可能受miR169、miR395a等抗逆相关miRNA的调控,参与花药开裂调控。由于TaBG表达量的升高,增加了不育环境下花药中可溶性糖的含量,进而增加花药中的渗透势,从而减缓花药开裂时的脱水活动,导致花药不开裂。     

紫杉醇和姜黄素联合使用的体内外抗乳腺肿瘤效果

为了探究紫杉醇(TAX)、姜黄素(CUR)联合使用在体内、体外抗乳腺肿瘤的作用,本试验采用CCK-8法测定TAX、CUR单体及二者联合使用对犬乳腺肿瘤细胞系7364的细胞增殖抑制率;将荷瘤小鼠随机分为生理盐水组、TAX组、TAX+CUR组,考察TAX、CUR联合使用对小鼠乳腺肿瘤细胞系(4T1)皮下移植瘤模型的抑瘤药效。体外试验结果显示,TAX单体药物对犬乳腺肿瘤细胞系7364的半数抑制浓度(IC₅₀)为0.191μmol/L,CUR单体药物IC₅₀为53.160μmol/L,CUR(0.25～2μmol/L)和TAX(0.013～0.4μmol/L)联合给药时TAX IC₅₀与其单独给药相比显著降低,表明TAX和CUR在一定比例、浓度时具有协同抗肿瘤效应。动物试验结果显示,TAX+CUR组初次给药后第11天肿瘤体积显著低于生理盐水组(P<0.05);治疗结束后完整剥离肿瘤,测得TAX+CUR组的抑瘤率为17.3%,而TAX组无明显抑瘤效果。结果表明TAX和CUR在一定配比、浓度条件下对犬乳腺肿瘤细胞系7364具有...     

高效液相色谱法同时测定介孔SiO_2/脂质复合递药系统中紫杉醇、姜黄素的含量

为了建立HPLC同时测定介孔SiO_2/脂质复合递药系统(LMSNs)中紫杉醇(TAX)与姜黄素(CUR)含量的方法。方法:Eclipse XDB-C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),乙腈与0.1%甲酸水溶液以不同比例梯度洗脱,流速1 mL/min,检测波长227 nm,柱温25℃,进样体积5μL。结果:TAX、CUR分别均在1.5~30μg/mL、6~300μg/mL范围内线性良好(TAX低、高浓度范围R~2各为0.999 7、1.000 0,CUR低、高浓度范围R~2各为0.999 9、0.999 9);TAX低、中、高浓度回收率各为(95.60±1.53)%、(98.83±1.02)%、(101.49±0.70)%,CUR为(101.44±0.04)%、(103.10±1.04)%、(103.66±0.47)%(n=3)。表明本方法准确度高、重复性好,可用于同时测定TAX-CUR介孔SiO_2/脂质复合递药系统中两药含量。