番茄基因转化中抗生素筛选压力的确定方法

在以抗生素为筛选标记的基因转化中。确定适宜的筛选压力是提高基因转化率的前提。本研究以卡那霉素为例，通过在10mg／L，20mg／L，30mg／L，50mg／L，100mg／L的筛选压力下，转化和非转化番茄子叶外植体的生长表现、愈伤组织和芽的分化率．来确定适宜的筛选浓度。本实验以该方法找到的适宜的卡那霉素筛选浓度为50mg／L。以此浓度为筛选压力进行遗传转化所获得的部分再生苗经southern blot鉴定．均为转化株。     

提高农杆菌基因转化率方法的研究

通过番茄转化过程中农杆菌侵染浓度、预培养时间、乙酰丁香酮、植物激素和植物组织浸提液对农杆菌和外植体的处理,研究了提高番茄基因转化率的方法.试验结果为:用过夜培养的农杆菌和稀释10倍的农杆菌侵染外植体以及用1倍马铃薯伤流液和1 mg/L低浓度的植物生长素处理外植体和农杆菌可以明显地提高番茄的转化率;乙酰丁香酮和番茄组织浸提液对转化率无显著影响;番茄子叶不经过预培养比预培养的转化率高.     

水杨酸对NR基因的表达和乙烯信号转导的影响

通过水杨酸与乙烯介导下番茄NR基因的表达、植株生理的变化、幼苗三重反应和幼苗生长表现,探讨了水杨酸对乙烯信号转导的影响。结果表明:水杨酸对野生型番茄植株的影响有双重作用。低浓度对植株有促进生长的作用,使黄化苗下胚轴伸长和维持正常的实生苗叶片细胞膜透性,促进根系的生长;较高浓度(≥100μmol·L~(-1))则促进幼苗表现三重反应,即诱导乙烯的合成,从而诱导NR基因的表达,使植株细胞膜透性增加、植株蒸腾作用和呼吸作用显著降低、气孔关闭(水杨酸处理后24h),最终番茄植株表现出叶片黄化等症状。乙烯不敏感型NR突变体番茄植株在高浓度处理时无外部受害症状,细胞中NR基因的表达被显著地抑制。可见抑制番茄NR基因的表达,增强了植株的抗性。     

FR 02全长基因的克隆表达载体的构建及转化苹果

从铁胁迫诱导的拟南芥植株根中克隆了全长的FR 02(Fe3+-螯合物还原酶)基因,并将FR 02基因构建到了植物高效表达载体pCB 302中.通过农杆菌介导的转化和PCR及Southern blot检测证明FR 02基因正向的插入了苹果基因组中.以破坏生长点的茎尖为外植体的苹果基因转化方法转化率高达10.8%.FR 02全长基因的成功克隆、构建和转化为高铁、抗黄化苹果和其他高铁作物新品种的培育开辟了一条新路.     

化学抑制剂对晚香玉叶宽的影响

采用四因素五水平的二次回归正交旋转组合设计，通过不同浓度、不同组合的PP333、乙烯剂、缩节胺和矮壮素处理与植株叶宽建立了关系模型，并通过对模型的解析确定了各因素、处理组合与植株矮化的关系。结果表明，PP333效果最显著，它也是影响植株叶宽的最重要、最直接的因素。其它3种药剂对晚香玉矮化的影响次之。此外，PP333和乙烯利对晚香主的矮化有互作效应，当两因素为高水平时，使叶片变宽，增强了对植株的矮化作用。晚香玉矮化的最佳处理组合是PP333 157－174mg/L，乙烯利300－338mg/L，缩节胺32－55mg/L，矮壮素221－272mg/L。     

低温、乙烯逆境下的番茄NR基因表达及相关反应

通过低温和乙烯逆境下番茄植株的生长表现和抗性生理指标的变化及乙烯受体蛋白基因NR的表达，研究了NR基因与低温和乙烯的关系。结果显示：低温(5℃)抑制了NR基因的表达，维持了细胞膜的完整性，并减轻和延缓番茄实生苗因乙烯胁迫所产生的黄化、衰老等症状；外源乙烯增加植株细胞膜透性，处理的时间越长、细胞膜透性增加得越多，但低温可以推迟这一进程；低温和乙烯都可显著增加植株叶片蒸腾作用、呼吸作用和气孔导度；在有和无外源乙烯时，低温和乙烯抑制剂Ag^ 均抑制番茄NR基因的表达。因此认为低温抑制了NR基因的表达，降低了植物对乙烯的敏感性，减轻和延缓了因胁迫乙烯的产生而造成的伤害；而抑制NR基因的表达，能提高植物的抗逆性；NR基因是乙烯和低温胁迫症状的正调节因子。     

逆境、激素与乙烯介导下幼苗三重反应的研究

以番茄为材料研究了不同逆境和激素处理下番茄黄化幼苗三重反应的变化。结果表明,LiCl、ABA和干旱促进番茄幼苗表现三重反应,诱导了内源胁迫乙烯的产生,并与外源乙烯协同作用。IAA和较低浓度的水杨酸使番茄黄化苗下胚轴伸长,表现出对生长的促进作用,与乙烯作用相拮抗。     

提高农杆菌基因转化率方法的研究

通过番茄转化过程中农杆菌侵染浓度、预培养时间、乙酞丁香酮、植物激素和植物组织浸提液对农杆菌和外植体的处理,研究了提高番茄基因转化率的方法。试验结果为：用过夜培养的农杆菌和稀释10倍的农杆菌侵染外植体以及用1倍马铃薯组织浸提液和1mg/L低浓度的植物生长素处理外植体和农杆菌可以明显地提高番茄的转化率;乙酰丁香酮和番茄组织浸提液对转化率元显著影响;番茄子叶不经过预培养比预培养的转化率高。     

水杨酸对NR基因的表达和乙烯信号转导的影响

通过水杨酸与乙烯介导下番茄NR基因的表达、植株生理的变化、幼苗三重反应和幼苗生长表现,探讨了水杨酸对乙烯信号转导的影响.结果表明:水杨酸对野生型番茄植株的影响有双重作用.低浓度对植株有促进生长的作用,使黄化苗下胚轴伸长和维持正常的实生苗叶片细胞膜透性,促进根系的生长;较高浓度(≥100 μ mol*L-1)则促进幼苗表现三重反应,即诱导乙烯的合成,从而诱导NR基因的表达,使植株细胞膜透性增加、植株蒸腾作用和呼吸作用显著降低、气孔关闭(水杨酸处理后24 h),最终番茄植株表现出叶片黄化等症状.乙烯不敏感型NR突变体番茄植株在高浓度处理时无外部受害症状,细胞中NR基因的表达被显著地抑制.可见抑制番茄NR基因的表达,增强了植株的抗性.     

FR 02全长基因的克隆表达载体的构建及转化苹果

从铁胁迫诱导的拟南芥植株根中克隆了全长的FR02（Fe^3＋-螯合物还原酶）基因,并将FR02基因构建到了植物高效表达载体pCB302中。通过农杆菌介导的转化和PCR及Southern blot检测证明FR02基因正向的插入了苹果基因组中。以破坏生长点的茎尖为外植体的苹果基因转化方法转化率高达10．8％。FR02全长基因的成功克隆、构建和转化为高铁、抗黄化苹果和其他高铁作物新品种的培育开辟了一条新路。