三角帆蚌细胞周期蛋白基因筛选及其表达分析

细胞周期蛋白(cyclin)对细胞生长繁殖起到关键的调节作用。该研究采用高通量测序技术,构建了三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)转录组文库,进行了cyclins基因筛选与生物信息分析,通过qRT-PCR技术,探讨其在不同组织(闭壳肌、内脏团、外套膜、斧足、心脏、血液、鳃、性腺)与性别中的表达特征。转录组测序共得到257 457条unigene(N50为1 796 bp),注释率为86.7%;通过分析,cyclin A、cyclin D2、cyclin E被筛选出,且cyclin A、cyclin D2与cyclin E蛋白的氨基酸序列均与美洲牡蛎(Crassostrea virginica)、太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)具有较高相似性。实时荧光定量分析结果表明,cyclin A、cyclin D2、cyclin E在三角帆蚌各组织中均有表达,且存在显著的组织差异:cyclin A、cyclin E基因在性腺中表达量显著高于其他组织(P<0.05),在斧足中表达量最低;cyclin D2基因在鳃中表达量最高(P<0.05),在血液中表达量最低。在同一组织的不同性别之间:cyclin A基因在性腺、闭壳肌、心脏、血液中表达存在显著性别差异(P<0.05);cyclin D2在外套膜、心脏、性腺中的表达具有显著(P<0.05)的性别差异;cyclin E在性腺、斧足、鳃、心脏中的表达具有显著(P<0.05)的性别差异;cyclin A、cyclin E基因在雌性心脏和性腺中表达量显著(P<0.05)高于雄性,而cyclin D2反之(P<0.05),cyclin D2基因在雌性外套膜表达量显著高于雄性(P<0.05),暗示cyclin A、cyclin E与性腺发育关系密切,cyclin D2可能与鳃损伤修复有关。本研究初步探究了三角帆蚌cyclin A、cyclin D2、cyclin E基因的功能,为建立三角帆蚌细胞系提供了分子基础。     

中草药饲料添加剂对蛋鸡生产性能及蛋品质的影响

目前我国家禽养殖业快速发展,取得了可观的经济效益,但目前家禽养殖集约化发展模式下,疫病、养殖环境污染等一系列问题限制了养殖业的发展.作为新型饲料添加剂替代抗生素,中草药饲料添加剂在蛋鸡生产性能及蛋品质方面的影响,对于蛋禽养殖业未来发展具有重大意义.     

太行鸡CCNB2基因剪接异构体的克隆鉴定及其在卵泡发育中的表达模式分析

【目的】试验旨在克隆鸡细胞周期素B2(cyclin B2,CCNB2)基因不同剪接异构体,并对其进行生物信息学和组织表达分析。【方法】采用反转录PCR技术对太行鸡CCNB2基因不同剪接异构体进行扩增和克隆,采用生物信息学软件对CCNB2基因不同剪接异构体的部分核苷酸序列进行比对,比较不同物种CCNB2不同剪接异构体的氨基酸序列相似性并构建系统进化树,对其进行亚细胞定位及二级结构预测。利用实时荧光定量PCR技术分析CCNB2基因不同剪接异构体在太行鸡卵巢和不同发育时期卵泡中的相对表达量。【结果】太行鸡CCNB2基因存在3种剪接异构体,即CCNB2-AS1、CCNB2-AS2和CCNB2-AS3,分别编码390、383和401个氨基酸。太行鸡CCNB2-AS1、CCNB2-AS2和CCNB2-AS3 3个剪接体之间的氨基酸序列相似性均为97.00％,这3个剪接体均与原鸡的相似性最高,分别为99.71％、99.71%和100％。3个剪接异构体在进化上与原鸡亲缘关系最近,其次为雉鸡。亚细胞定位结果表明,3个剪接异构体均主要定位于细胞质;蛋白质二级结构分析显示,3种剪接异构体均以α-螺旋为主;CCNB2-AS1、CCNB2-AS2和CCNB2-AS3在太行鸡不同发育时期卵泡中的相对表达量存在差异,并且不同剪接异构体在同一时期卵泡中的表达趋势也存在差异,其中CCNB2-AS1在等级前卵泡中高表达;而CCNB2-AS2在大白卵泡中表达量显著高于其他时期(P＜0.05),且在其他时期均以较低水平表达;CCNB2-AS3的表达则与CCNB2-AS1呈现相反的表达趋势,在等级卵泡中高表达。【结论】本研究成功鉴定到太行鸡CCNB2基因的3种剪接异构体,其在各时期卵泡中均有表达,但在等级前卵泡中的表达趋势存在差异。     

高温雨季太行鸡应加强"三个管理"

今年进入7月中下旬以来,我省暴雨天气明显增多,此阶段暴雨持续时间长、降雨量大,正值夏季高温时期,在这种高热高湿环境下,如果放养太行鸡管理不当,不仅造成产蛋量急剧下降,还有可能暴发寄生虫病及细菌病,造成养殖效益大幅下降.为此,加强太行鸡高温雨季"三个管理",就显得格外重要.     

基于蛋白质组学的三角帆蚌珍珠囊形成相关免疫因子研究

采用iTRAQ及生物信息分析技术研究三角帆蚌珍珠囊及外套膜外膜组织蛋白组差异,筛选其与珍珠形成和生长进程中的免疫调节因子,并通过数字基因表达谱,分析了外套膜插核进程中免疫相关因子的mRNA表达水平。研究结果表明,1871个蛋白被鉴定到,其中显著性差异表达蛋白119个(P<0.05),包括上调蛋白74个,下调蛋白45个;分析发现差异表达蛋白主要具有结合、催化、结构分子、运载体、调节酶等活性,主要富集于次生代谢、变形虫病、糖酵解与糖异生、近端小管碳酸氢盐回收、心肌病、甲烷代谢、脂肪细胞因子pathway。进一步筛选获得免疫相关蛋白37个(19个上调蛋白和18个下调蛋白),其主要富集于Notch、Hippo、NF-κB、TGF-β等信号通路,参与免疫球蛋白、凋亡、损伤愈合以及炎症反应。对上调蛋白中的MRC1、LBP、EPX、FcGBP以及下调蛋白中的CD109、CNN3、NOTCH3、LAMB2等在外套膜以及插核后5、20 thd的插核组织和50、90 thd的珍珠囊组织中mRNA表达量进行分析验证,表达与蛋白水平表达趋势相同,对后续将进一步关注不同免疫相关蛋白间的相互作用及其潜在关联,为阐述贝类免疫系统调节网络研究提供基础资料。     

禾谷镰刀菌内吞蛋白FgSyp1的功能研究

内吞作用在细胞的营养吸收和信号转导过程中起重要作用。在真核生物中Syp1和Ede1是网格蛋白介导内吞的早期蛋白成员。禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)引起的小麦赤霉病严重影响小麦产量和品质。禾谷镰刀菌含有酿酒酵母SYP1的一个同源基因FgSYP1。酵母双杂交表明禾谷镰刀菌FgSyp1与FgEde1存在互作关系。利用同源重组的方法得到ΔSyp1突变体和ΔΔSyp1/Ede1双敲突变体,通过生长、产孢和致病性等实验测定禾谷镰刀菌FgSyp1功能。研究表明FgSyp1在禾谷镰刀菌菌丝生长、无性生殖和致病性发挥重要作用,ΔΔSyp1/Ede1双敲突变体在无性和有性生殖方面表现出比ΔSyp1突变体更显著的效果。     

酵母硒对太行鸡产蛋性能、蛋品质、鸡蛋抗氧化性能及硒含量的影响

试验旨在研究饲粮添加酵母硒对太行鸡产蛋后期产蛋性能、蛋品质、鸡蛋抗氧化性能及蛋硒含量的影响。试验选用54周龄产蛋率接近、健康状况良好的产蛋后期太行鸡300只,随机分为5组,每组6重复,每重复10只鸡。对照组饲喂基础日粮,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别在基础日粮添加0.15 mg/kg、0.30 mg/kg、0.45 mg/kg、0.60 mg/kg的酵母硒（以硒计）。预饲期7 d,试验期63 d。结果显示：与对照组相比,试验Ⅰ组合格蛋率及产蛋率显著提高（P<0.05）,试验Ⅱ组产蛋率显著提高（P<0.05）。与对照组相比,试验Ⅰ组蛋壳厚度显著提高（P<0.05）,蛋白高度和蛋形指数显著改善（P<0.05）;试验Ⅱ组蛋白高度及哈氏单位显著提高（P<0.05）,蛋壳厚度极显著提高（P<0.01）;试验Ⅲ组蛋壳厚度极显著增加（P<0.01）,蛋白高度和哈氏单位显著提高（P<0.05）;试验Ⅳ组蛋壳厚度及蛋白高度极显著增加（P<0.01）,蛋形指数极显著改善（P<0.01）。与对照组相比,各试验组鸡蛋谷胱甘肽过氧化物酶活性、总超氧化物歧化酶...     

太行鸡FST基因克隆、序列特征及表达分析

旨在基于生物信息学方法分析太行鸡卵泡抑素基因（follistatin，FST），并研究其在不同组织及卵泡不同发育时期表达差异，解析FST对太行鸡产蛋性能的影响。本研究使用RT-PCR对43周龄健康太行鸡FST基因编码区序列进行克隆和测序，运用生物信息学软件对其功能结构进行预测，荧光定量PCR技术对43周龄健康麻羽太行鸡FST在不同组织及不同发育时期卵泡中的表达差异进行分析，每组设3个重复，进行3次平行试验。结果显示，太行鸡FST基因编码区为1 032 bp，编码343个氨基酸，太行鸡FST蛋白与日原鸡同源性最高（100.0%），存在Sec信号肽，成熟蛋白具有FOLN和KAZAL_FS 2个保守结构域。该蛋白为亲水蛋白，蛋白分子式为C₁₆₁₉H₂₅₆₇N₄₅₉O₅₂₀S₄₄，分子量为38.192 6 ku，理论等电点为5.59，其中含量最高的是Cys （C），为10.50%；蛋白质二级结构含有α-螺旋、延伸链、β转角、无规卷曲，占比分别为16.33%、16.62%、5.25%、61.81%。FST基因在不同组织中均有表达，在肝中表达量最高。FST基因在各级卵泡表达量存在差异，其中，在大白卵泡中表达量最高（P<0.01），在卵泡选择前后表达量存在1.6倍表达差异。上述结果为研究太行鸡FST基因结构和功能提供了重要的基础数据，也为进一步挖掘太行鸡产蛋性能候选高产基因提供了参考。     

乡村振兴战略背景下农村空心化治理路径研究

乡村振兴战略的提出,已成为农业农村现代化进程的重要推手.然而,农村空心化问题严重阻碍了乡村振兴战略的实施.该文从城乡差异、农村布局规划、思想观念以及文化传承等方面出发,探究了农村空心化问题产生的原因;并结合乡村振兴的时代背景,从加快农村发展振兴,增强农民返乡吸引力;保障农民合法权益,完善惠农政策;培养本地优秀人才,成就新型职业农民;提高思想意识水平,促进农民治理参与度等维度,探讨了乡村振兴战略背景下农村空心化问题的治理路径.     

三角帆蚌IGF2基因的亚细胞定位及重组蛋白促体外细胞活性分析

胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factors 2, IGF2)在多种细胞生长、分化和合成代谢的调节中发挥重要的调控作用。本研究成功构建了淡水珍珠贝三角帆蚌IGF2的重组质粒pEGFP-IGF2和pET32a-IGF2,通过pEGFP-IGF2-细胞转染,表明该蛋白定位在细胞质与细胞核中。将pET32a-IGF2转化到BL21 (DE3)中进行蛋白诱导表达,成功得到其原核表达载体,SDS-PAGE检测显示,在约25kD处有一条清晰的条带,符合目的条带大小（26.27kD）,且主要表达于上清液中。为研究重组蛋白IGF2对三角帆蚌细胞活性的作用,本研究通过CCK8细胞活性测定,进一步探讨了添加不同浓度重组目的蛋白（0 μg/mL、2.5 μg/mL、5 μg/mL、7.5 μg/mL、 12.5 μg/mL、17.5 μg/mL、 22.5 μg/mL）培养的三角帆蚌外套膜细胞增殖活性。结果显示,三角帆蚌IGF2重组蛋白能显著促进三角帆蚌外套膜细胞的增殖活力（P＜0.05）,且在其浓度为12.5 μg/mL时对三角帆蚌外套膜细胞的促生长效果最佳,这为促进三角帆蚌外套膜细胞传代、细胞系建立奠定了基础,也为下一步探究IGF2在贝类中的功能提供依据。