一种改进的大麦根尖染色体压片法及其应用

以大麦根尖为实验材料,采用改良的苯酚品红为染色液,在《遗传学实验》的基础上探索适宜的预处理时间、解离时间和染色时间,省略了纤维素酶和果胶酶处理步骤,形成了一套快速、简单的大麦根尖压片方法,该方法获得的染色体图像清晰,便于计数,可用于大麦倍性鉴定和染色体变异方面的研究。     

基于响应面法优化兰州百合芽增殖培养基

以兰州百合鳞片为外植体获得的小鳞芽为材料,利用响应面法的Box-Behnken设计方法,对百合组培芽增殖进行试验优化。结果从响应面法优化模型得出的芽增殖最佳培养基为MS+1.25 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,在此条件下,增殖系数达3.82。     

利用RNAi技术沉默大麦B-Hordein基因的研究

为限制大麦籽粒中贮藏蛋白的积累,降低其蛋白质含量,以大麦幼胚为受体材料,采用农杆菌介导的转化方法,将大麦B组醇溶蛋白基因gp4/antisense gp4片段与Ubi启动子相连导入大麦,经PCR检测证实,含有gp4反向重复基因片段的RNAi抑制表达框架已成功转入大麦。RT-PCR结果表明,转基因株系中B-Hordein mRNA积累受到明显抑制。收获T1代籽粒,经近红外谷物分析仪测定表明,2个转基因大麦株系籽粒蛋白质含量(分别为11.4%、11.7%)较对照(12.3%)降低。因此,利用RNA干涉技术降低大麦蛋白质含量是可行的。     

兰州百合同源四倍体诱导及其基因组大小估算

兰州百合(2n=2x=24)是重要的“药食同源”植物,进行其种质创新和基因组大小分析对于丰富其种质资源和生物学信息具有重要意义。以兰州百合的种子和试管小鳞茎为试验材料,通过秋水仙素浸泡诱导染色体加倍,经流式细胞仪倍性检测获得的同源四倍体植株分别有10和4株,四倍体诱导率分别为21.11%和33.27%。为了估算兰州百合基因组大小,以小麦品种“中国春”为内标,通过流式细胞仪测算兰州百合二倍体和四倍体植株中的DNA含量,得出兰州百合基因组为64.9 Gbp,是“中国春”核基因组的4倍。     

半夏凝集素基因对小麦的遗传转化研究

为了拓宽农杆菌介导的小麦遗传转化的受体基因型,同时改良小麦品种的抗蚜特性,以甘肃省主推春小麦品种陇春22和优良品系9614的幼胚为转基因受体材料,以预培养4d的幼胚愈伤组织为受体,以含有半夏凝集素基因的C58c1农杆菌菌株为供体,将重组质粒pBI pta导入小麦,建立了农杆菌介导的小麦遗传转化体系。经G418 25mg.L-1抗性筛选、PCR检测共获得转基因植株7株,其中9614的4株,陇春22的3株;采用荧光定量PCR分析得出转基因植株中单拷贝的有1株,2个拷贝的1株,3个拷贝和4个拷贝的各有2株,1株没有得到扩增。对整合有2个拷贝半夏凝集素基因的陇春22-20转基因小麦的T1代植株进行了PCR检测,其中有50%的植株扩增出目的基因,50%没有扩增出目的基因,初步说明T1代植株中外源基因得到了遗传。     

不同基因型马铃薯试管薯的诱导及其再生研究

以陇薯3号(L3)、陇薯6号(L6)、新大坪(XDP)和渭薯1号(W1)的脱毒试管苗为试验材料,进行微型薯的诱导及其薯片再生研究.结果表明,在全黑暗条件下采用液体MS+8%蔗糖为培养基,所有品种都诱导出了微型薯,但不同基因型的马铃薯诱导效果明显不同.综合分析单瓶结薯数、薯块大小、微型薯产量和大薯率等几个指标,诱导微型薯由易到难的顺序是XDP>W1>L6>L3.试管微型薯片再生频率由高到低的顺序是L3>L6>W1>XDP.     

农杆菌介导半夏凝集素基因对油菜的遗传转化

以3～4d苗龄的甘蓝型油菜品种陇油2号带柄子叶为转化受体材料,通过农杆菌LBA4404介导将半夏凝集素抗虫基因（pta）导入,获得抗卡那霉素的抗性植株3株。实验中还对影响油菜遗传转化的外源激素种类和配比进行了研究,结果表明,在预培养阶段1．0mg／L 2,4-D与0．2mg／L6-BA配合使用比单独使用2,4-D效果好,在幼苗分化阶段2．5mg／L6-BA、0．1mg／L NAA和0．5mg／L GA3配合使用有促进芽分化、抑制根分化的作用。     

兰州百合病毒RT-PCR检测技术建立及应用

病毒病是引起兰州百合产量下降、品种退化的主要原因,准确、高效的病毒检测技术在百合脱毒种球生产和推广应用中十分重要。根据CMV、LSV和LMoV病毒外壳蛋白基因序列设计引物,以百合18S rRNA为内参照,建立兰州百合病毒RT-PCR、二重RT-PCR检测体系。对兰州百合主栽区病毒病的抽样调查发现,CMV、LSV带毒率分别达到98%、100%,LMoV检出率在不同时期样品中存在较大差异。     

人参果主要病毒检测方法研究

为了给人参果病毒检验及抗病性研究提供支持,对人参果采用ELISA和RT-PCR两种检测方法对8份田间材料中的马铃薯M病毒(PVM)、番茄花叶病毒(ToMV)和烟草花叶病毒(TMV)进行检测,对比筛选病毒检测方法。结果表明,ELISA法检测PVM的阳性检出率为87.5%;ToMV为37.5%,疑似率为12.5%;TMV为37.5%。通过RT-PCR检测体系,从人参果样品中分别扩增出与试验设计大小相符的特异条带,PVM阳性检出率为100%,ToMV为 50.0%,TMV为37.5%,检测灵敏性和准确性更高,检测结果符合率在87.5%以上。对扩增阳性产物进行凝胶回收测序,确定为目标条带。     

兰州百合组培小鳞茎诱导技术研究

采用组织培养方法对兰州百合鳞片不同部位芽诱导和试管小鳞茎生根膨大进行研究。结果表明,兰州百合最佳外植体为鳞片下部,其次为鳞片中部,鳞片上部不适于作外植体材料。组培小鳞茎一次膨大和二次膨大分别处理60、90、120 d的鲜重和横径均随着处理时间的增加而增大,且二次膨大比一次膨大效果显著。