一种高效干冻研磨破碎酵母细胞的方法

[目的]建立简便有效的破碎酵母细胞的方法。[方法]离心收集酵母细胞,将培养液洗涤干净后直接将酵母细胞和研钵预冷至-20℃,然后在冰冻状态将酵母细胞置于研钵中研磨,在相差显微镜下观察酵母细胞的形态,计算细胞破碎效率,并提取破碎酵母的染色体DNA和蛋白质。[结果]镜下观察研磨后酵母完整细胞数明显减少,并有大量细胞碎片。计数得出研磨1、2、3、4、6、8、10min后破碎细胞的百分数为13.7%、30.1%、52.0%、85.1%、93.4%、94.6%、95.9%,0.1g酵母细胞研磨后抽提到的DNA和蛋白质的量分别为20μg和2.928mg。常规条件干冻酵母细胞直接研磨获得良好的破碎效果,破碎效率达95.9%。[结论]该研究建立了一种简便、高效而又经济的裂解酵母细胞的方法。