依托省部级重点实验室的研究生培养思路探索

结合省部级重点实验室多年来在培养研究生过程中的实践与体会,从日常管理、技能培训、内部制度建设等方面阐述分析了省部级重点实验室在创新研究生培养思路中的探索尝试。     

黑曲霉糖化酶基因的克隆及其在毕赤酵母X33中的表达

[目的]以毕赤酵母（Pichia pastoris）X33为宿主菌高效表达黑曲霉（Aspergillus niger）糖化酶,为进一步扩大糖化酶在工业上的应用奠定基础。[方法]利用RT-PCR技术,提取黑曲霉总RNA进行反转录,以得到的cDNA为模板,根据NCBI数据库中A.nigerCBS513.88糖化酶的cDNA序列（glaA）设计引物,通过PCR扩增得到去除天然信号肽的糖化酶成熟肽编码基因glaAm,并将其克隆到pUC19载体中,序列分析表明,glaAm的开放阅读框由1 879个核苷酸组成,编码625个氨基酸。以此片段构建了pFLDα-glaAm重组表达载体,经NsiI线性化后,电击转化毕赤酵母X-33。摇瓶培养中通过添加终浓度为0.5%的甲醇诱导糖化酶的分泌。[结果]SDS-PAGE和Starch-PAGE显示,糖化酶得到正确的分泌表达,且具有较高的生物活性,发酵上清液中酶活最高达到380.78 U/ml（发酵液）。重组糖化酶的最适反应温度和最适pH分别为6065℃和4.0,在pH2.55.5范围内均保持90%以上的酶活力。该酶具有较高的热稳定性,pH4.0条件下,该酶在50℃下稳定;60℃处理60 min,仍能保持90%以上的酶活力;65℃下的半衰期约为44 min。[结论]黑曲霉糖化酶基因在毕赤酵母X33中得到了异源高效表达。     

益生菌的分类、生理功能与有效性评价研究进展

益生菌是对宿主健康有益的活的微生物,大量研究结果表明益生菌在消化道、免疫和心血管系统等诸多健康方面发挥了作用。综述了益生菌的分类与生物学特性,以及益生菌调节血脂、降血压、降血糖、抗过敏和调节免疫功能的研究进展,并对其黏附或定植评价、活性保护技术及代表性商业产品进行了介绍,以期为开展益生菌相关研究开发工作提供一定的帮助。     

枯草芽孢杆菌RZ001对乳鼠肠道发育、肠道菌群和Wnt信号通路相关基因表达的影响

本试验旨在研究枯草芽孢杆菌RZ001的早期定植对乳鼠早期生长、肠道发育、肠道菌群和Wnt信号通路相关基因表达的影响。选择4窝数量相同的新出生的C57BL/6小鼠乳鼠,分为2个组(对照组和试验组),每组2个重复。从出生后第2天开始,试验组乳鼠连续14 d灌胃10μL枯草芽孢杆菌RZ001(1×10^7 CFU/d),对照组乳鼠连续14 d灌胃10μL磷酸盐缓冲液(PBS)。结果表明:1)与对照组相比,试验组的乳鼠从出生后第2天到第8天体重显著或极显著增加(P<0.05或P<0.01),脾脏、肾脏、胸腺重量和指数显著或极显著增加(P<0.05或P<0.01),但肝脏重量和指数无显著差异(P>0.05)。2)与对照组相比,试验组的小肠绒毛密度、绒毛长度和绒毛长度/隐窝深度显著或极显著增加(P<0.05或P<0.01),隐窝深度极显著降低(P<0.01)。3)与对照组相比,试验组的小肠杯状细胞的数量显著增加(P<0.05),小肠中黏蛋白2(MUC2)的mRNA相对表达量和MUC2含量均显著增加(P<0.05)。4)与对照组相比,试验组的小肠中闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、闭锁蛋白(Ocln)、封闭蛋白-3(Cldn-3)的mRNA相对表达量均极显著增加(P<0.01)。5)与对照组相比,试验组的小肠中Wnt3、卷曲受体蛋白7(Fzd7)、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(Lrp5)、糖原合成激酶-3β(Gsk-3β)、Ctnnb1、细胞性骨髓细胞瘤病毒癌基因(C-myc)、轴蛋白抑制蛋白2(Axin2)、无张力同系物1(Atoh1)、富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(Lgr5)和Ki67的mRNA相对表达量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),但低密度脂蛋白受体相关蛋白6(Lrp6)的mRNA相对表达量显著降低(P<0.05);同时,试验组的小肠中β-连环蛋白(β-catenin)蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。6)门水平上,与对照组相比,试验组的盲肠中拟杆菌门的相对丰度显著增加(P<0.05),而厚壁菌门的相对丰度显著降低(P<0.05)。属水平上,与对照组相比,试验组的盲肠中双歧杆菌属的相对丰度极显著增加(P<0.01),而产气荚膜梭菌的相对丰度极显著降低(P<0.01)。由此可见,早期应用枯草芽孢杆菌RZ001能够促进乳鼠生长,改善肠道形态,促进肠道屏障功能成熟,从而促进早期肠道发育。早期应用枯草芽孢杆菌RZ001还能够激活Wnt信号通路,降低肠道致病菌产气荚膜梭菌的相对丰度,增加肠道益生菌双歧杆菌属的相对丰度。