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差异显示PCR (differential display PCR,DDRT-PCR)技术是快速分离差异表达基因的强有力工具,但是其繁琐的染色程序和较高的假阳性率给研究者带来了不便.为了提高DDRT-PCR技术的效率和试验结果的清晰度和重复率,本研究以济宁青山羊皮肤组织的总RNA为试验材料,对影响DDRT-PCR的因素,如:反转录条件、反应体系和染色条件进行了优化研究.通过对染色程序和温度等染色条件的反复对比试验,建立了快速银染技术,得到了十分清晰的DDRT-PCR电泳图谱.快速银染技术既缩短了染色时间,又可以得到清晰的电泳图谱. 相似文献
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不同生长速度牙鲆的肌肉组织基因差异表达研究 总被引:1,自引:0,他引:1
为探讨牙鲆生长的分子遗传机理,选取同一饲养环境下生长的60日龄牙鲆,根据体重和体长的显著差异分成大小两组,筛选出14对引物组合,应用mRNA差异显示技术,研究了两组牙鲆肌肉组织的基因表达差异。在8%的聚丙烯酰胺凝胶上共获得241条可重复扩增的条带,占可扩增条带(288条)的77.43%。其中有223条为共有条带,占总条带数(241)的92.53%;差异表达的片段有18条,占总条带数(241)的7.47%;它们只表现为强弱的差异,没有发现“有或无”的基因表达差异现象。实验结果说明:在长期相同的人工养殖条件下,牙鲆肌肉组织中基因的mRNA表达差异较少;相同养殖环境条件下表现出不同生长速度的牙鲆鱼肌肉组织中所存在的强与弱的基因表达差异的原因,可能源于调控其肌肉组织生长发育基因的内含子调控序列存在某些差异。 相似文献
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