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通过BL21(DE3)原核表达系统制备抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)猪源化单链抗体scFv-Fc。提取抗PEDV杂交瘤细胞2D1的总RNA,通过反转录与SOE-PCR方法获得单链抗体scFv基因,同时提取猪脾脏组织的总RNA,RT-PCR获得猪免疫球蛋白恒定区Fc基因。通过SOE-PCR方法将scFv与Fc连接获得猪源性单链抗体scFv-Fc融合基因,构建重组质粒pET-28a-scFv-Fc,将该重组质粒转入BL21(DE3)原核表达菌进行诱导表达,SDS-PAGE分析及Western blot检测融合蛋白的特异性,再对表达蛋白进行纯化和复性,通过间接ELISA鉴定融合蛋白与PEDV的结合活性。结果显示,插入pET-28a载体的scFv-Fc序列长度1 128bp,抗PEDV猪源化单链抗体的相对分子质量为45 800,重组蛋白具有较高的特异性。本研究成功构建了pET-28a-scFv-Fc原核表达系统,重组蛋白具有较高的免疫反应性,为PEDV重组抗体的研究奠定理论基础。 相似文献
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【目的】研究不同改性条件对沸石吸附沼液效果的影响,为沼液的高效低耗处理提供理论依据。【方法】以化学需氧量(COD)、氨态氮(NH3-N)、总磷(TP)去除率为测定指标,以天然斜发沸石为对照,采用微波-氯化钠法改性沸石,研究微波功率、微波作用时间、氯化钠质量浓度、温度等改性条件对沸石处理沼液效果的影响。【结果】沸石最佳改性条件为:微波功率476W,微波作用时间9min,氯化钠质量浓度80g/L,搅拌温度25℃。天然斜发沸石对沼液中COD、NH3-N、TP的去除率分别为14.96%,27.54%和18.27%,而在最佳条件下所得的改性沸石对沼液中COD、NH3-N、TP的去除率分别达到32.26%,89.05%,48.33%,明显高于天然斜发沸石。【结论】得到了沸石改性的最优条件,为改性沸石在沼液吸附处理中的应用奠定了基础。 相似文献
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通过RT-PCR技术扩增猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)coe基因,将其克隆至原核表达载体p ET32a中,构建重组表达质粒p ET32a-coe,鉴定正确后进行诱导表达。结果表明,重组菌可表达相对分子量约为33 k D的融合蛋白;Western-Blotting结果显示,COE蛋白能与抗PEDV的阳性血清发生特异性结合反应,表明研究的COE蛋白具有良好的反应原性。纯化后的COE蛋白与弗氏佐剂按比率混合作为免疫抗原,免疫产蛋鸡,获得特异性抗猪流性腹泻病毒COE蛋白的卵黄抗体(Ig Y)。氯仿抽提法提取卵黄抗体,通过SDSPAGE、Western-Blotting对提取的卵黄抗体进行鉴定并用间接酶联免疫吸附实验(ELISA)对其进行效价检测。结果显示,纯化后的卵黄抗体Ig Y具有高度的特异性,其抗体效价可达1∶1 000。研究结果表明,表达的COE蛋白具有良好的免疫原性,作为免疫抗原制备的卵黄抗体具有较高的抗体效价。 相似文献
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