猪NLRP6蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备

试验旨在表达、纯化猪NLRP6蛋白,并制备鼠抗NLRP6多克隆抗体。根据猪NLRP6全基因核苷酸序列(GenBank登录号:XM_003124236.4)设计特异性引物,利用PCR方法从pMD-19T-NLRP6重组载体中扩增NLRP6基因片段,将扩增产物与原核表达载体pET-32a(+)连接,获得重组质粒pET-32a-NLRP6,经抗性筛选阳性菌、双酶切鉴定、PCR及测序分析后,将其转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中,并进行IPTG诱导表达及Western blotting鉴定。对获得的重组融合蛋白进行可溶性分析,经变性、镍柱亲和纯化、复性后得到纯化的融合蛋白,将其免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体。结果显示,试验成功克隆大小约为576 bp的NLRP6基因序列,经鉴定重组质粒pET-32a-NLRP6构建正确,通过IPTG诱导获得大小约34 ku的NLRP6重组融合蛋白,Western blotting分析表明其与小鼠抗6×His单克隆抗体呈阳性反应。可溶性分析结果显示,NLRP6重组融合蛋白以包涵体形式存在,约占95%。纯化的NLRP6重组融合蛋白免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体,经Western blotting分析显示出特异性反应。本试验成功制备了具有免疫原性的NLRP6蛋白及其鼠源多克隆抗体,为NLRP6蛋白生物学功能及相关疾病致病机制研究提供了基础材料。     

生猪屠及宰后检验实际操作技术

随着生猪“定点屠宰”、“集约化屠宰”的进行，我们的检疫工作也由过去的“零散型”转变为“专一型”、“全能型”、“定员定岗制”。有些检疫人员尚不能适应，工作起来有些吃力，特将多年在生猪大型屠宰厂工作的经验总结如下，望与诸位同行分享共勉，商榷切磋。生猪屠宰分为宰前检疫和宰后检疫两个环节，宰前检疫是对生猪进行初步筛选和卫生把关，生猪经过宰前检疫后，经冲淋、窒息、放血进入宰后检疫环节，检疫人员按照“五岗（头部检验、胴体检验     

健全内部监督机制 规范动物卫生行政静海县动物检疫站买行动物卫生行政执法"两错"贡任追究制

1指导思想和原则 在动物卫生行政执法机关实施错案和执法过错(以下简称"两错")责任追究制度,是对行政执法机关及其工作人员在行政执法中因主观故意或过失造成的错案和执法过错,依照有关法律和政纪规定,予以经济、行政责任追究的行业内部监督制约制度,是完善和深化部门执法责任制的一项重要举措.     

猪NLRP6蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备

试验旨在表达、纯化猪NLRP6蛋白,并制备鼠抗NLRP6多克隆抗体。根据猪NLRP6全基因核苷酸序列（GenBank登录号：XM_003124236.4）设计特异性引物,利用PCR方法从pMD-19T-NLRP6重组载体中扩增NLRP6基因片段,将扩增产物与原核表达载体pET-32a（+）连接,获得重组质粒pET-32a-NLRP6,经抗性筛选阳性菌、双酶切鉴定、PCR及测序分析后,将其转化大肠杆菌Rosetta（DE3）感受态细胞中,并进行IPTG诱导表达及Western blotting鉴定。对获得的重组融合蛋白进行可溶性分析,经变性、镍柱亲和纯化、复性后得到纯化的融合蛋白,将其免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体。结果显示,试验成功克隆大小约为576 bp的NLRP6基因序列,经鉴定重组质粒pET-32a-NLRP6构建正确,通过IPTG诱导获得大小约34 ku的NLRP6重组融合蛋白,Western blotting分析表明其与小鼠抗6×His单克隆抗体呈阳性反应。可溶性分析结果显示,NLRP6重组融合蛋白以包涵体形式存在,约占95%。纯化的NLRP6重组融合蛋白免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体,经Western blotting分析显示出特异性反应。本试验成功制备了具有免疫原性的NLRP6蛋白及其鼠源多克隆抗体,为NLRP6蛋白生物学功能及相关疾病致病机制研究提供了基础材料。     

肉鹅饲养管理技术

1进雏前及育雏时应注意的事项 1．1封闭好门窗,安好炉子,做好升温保温工作。 1．2育雏室充分消毒,一般采用熏蒸法。用量为3g／m^2,药剂选用得克斯,分散在舍内,点燃后关好房门封闭24h,之后打开门窗通风。     

猪高热病的防控措施

1症状及发病情况近年来，天津市乃至我国许多养猪场户猪群相继发生了以高热、气喘、不食、皮肤发红为特征的疫病，此病死亡率高、治疗效果差，使多数场户遭受严重的经济损失。2007年1月农业部组织有关部门及专家对此病进行科技攻关，     

猪高热病的防控措施

近年来,我国许多养猪场户猪群相继发生了以高热、气喘、不食、皮肤发红为特征的疫病,此病死亡率高、治疗效果差,使多数场户遭受严重的经济损失。2007年1月农业部组织有关部门及专家对此病进行科技攻关,     

宣传动物防疫法 依法实施动物检疫

2008年1月1日实施了新修订的《中华人民共和国动物防疫法》,这就为做好当前防控重大动物疫病工作和保障动物产品的质量安全提供了有力的法律武器。为使社会公众,正确维护自己的合法权益,认真履行应尽的义务,积极     

犬 猫皮肤癣菌病的诊治

<正>1皮肤癣菌病的病原1.1皮肤癣菌病是一群形态、生理、抗原性上关系密切的真菌,按大小分生孢子的形态可分为3个属:毛癣菌属、小孢子菌属和表皮癣菌属,约40余个种,其中约20余种能引起人或动物的感染。引起犬、毛皮肤癣菌感染的病原主要有:犬小孢子菌,石膏样小孢子菌和须毛癣菌等。1.2根据皮肤癣菌的自然寄居特性,可分为3类:亲动物性,主要侵犯动物,也可引起人感染皮肤癣菌病,如犬小孢子菌和须毛癣菌即属此类;亲人性,主     

健全内部监督机制 规范动物卫生行政——静海县动物检疫站实行动物卫生行政执法“两错”责任追究制

1指导思想和原则在动物卫生行政执法机关实施错案和执法过错(以下简称"两错")责任追究制度,是对行政执法机关及其工作人员在行政执法中因主观故意或过失造成的错案和执法过错,