爬山虎内生菌的鉴定及其谷氨酸脱羧酶酶学特性

从爬山虎茎中分离到5株内生菌,其中菌株EJC-1具有谷氨酸脱羧酶(GAD)活性.当湿菌体与10 g·L-1谷氨酸钠溶液比例为1∶10(W∶V)时,在30 ℃和120 r·min-1下振荡反应24 h,细胞转化液中γ-氨基丁酸浓度为(3.07±0.23)mmol·L-1.通过形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列分析鉴定EJC-1为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium).同时基于16S rDNA构建了系统进化树,并对EJC-1进行了系统发育分析.B.megaterium EJC-1 GAD的最适反应温度和pH分别为50 ℃和5.6.低于40 ℃,GAD在pH 5～6范围内较稳定.2.5 mmol·L-1 Mg2+对GAD活力具有显著的促进作用,活力提高了13.85%.     

一株产巴卡亭Ⅲ红豆杉内生真菌的分离与鉴定

[目的]分离鉴定产巴卡亭Ⅲ红豆杉内生真菌。[方法]采用常规分离方法,从东北红豆杉（TaxuscuspidataSieb.etZucc.）树皮中分离并筛选内生真菌35株;通过高效液相色谱（HPLC）技术对菌株发酵物进行检测,并结合选择性离子质谱（MS）进行确认,从中获得1株能产紫杉醇前体物质巴卡亭Ⅲ的菌株Z-1;利用ITSrDNA通用引物对产紫杉烷类物质的内生真菌进行分子生物学鉴定,并结合菌落特征、孢子与分生孢子梗的形态特征进行分类鉴定。[结果]在未经诱导的情况下,Z-1产巴卡亭Ⅲ的量约为39μg/L;形态和分子鉴定分析判定Z-1属于木霉属（Trichoderma sp.）真菌。[结论]该研究可为植物内生真菌产紫杉烷类化合物的种类多样性和产紫杉烷类内生真菌的生物多样性提供依据。     

玉米褪绿斑驳病毒3种PCR检测方法的建立与比较

 以带有玉米褪绿斑驳病毒(MCMV)的玉米叶片为材料,研究建立了MCMV 的普通RT-PCR、TaqMan 实时荧光RT-PCR 和SYBR Green Ⅰ实时荧光RT-PCR 检测方法,并比较了3种方法的灵敏度。结果表明:TaqMan 实时荧光RT-PCR 的检测灵敏度最高,最低检出量可达1.61 fg,SYBR Green Ⅰ实时荧光RT-PCR 略逊之,普通RT-PCR 的检测灵敏度则相对较低,与前两者相差10~100倍。     

基于聚类统计分析的二维凝胶电泳连配方法的研究

二维凝胶电泳实验产生的二维凝胶图片包含几百到上千个蛋白质电泳点,蕴含了丰富的生物学信息,需要借助相应的软件进行分析解读才能为人们所用.而凝胶图片之间点的连配的精确度直接影响软件分析的结果和后续对二维凝胶图片所蕴含信息的正确解读.本文采用聚类和统计方法研究凝胶图像之间点的连配.与经典软件分析结果相比,本研究纠正了70.8%的连配错误,增加了21.2%的缺失连配信息,显著改善了连配分析结果.     

酸法水解骨粉的研究

本试验以醋酸、磷酸、柠檬酸和乳酸分别作用骨粉,转化骨粉中钙为可溶性钙,四种酸转化骨钙的百分率分别为１９．３％,２８．８％,３０．７％和２２．８％。可生钙经浓缩干燥成为干粉状钙剂。     

爬山虎内生菌的鉴定及其谷氨酸脱羧酶酶学特性

从爬山虎茎中分离到5株内生菌,其中菌株EJC-1具有谷氨酸脱羧酶(GAD)活性.当湿菌体与10 g·L-1谷氨酸钠溶液比例为1∶10(W∶V)时,在30 ℃和120 r·min-1下振荡反应24 h,细胞转化液中γ-氨基丁酸浓度为(3.07±0.23)mmol·L-1.通过形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列分析鉴定EJC-1为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium).同时基于16S rDNA构建了系统进化树,并对EJC-1进行了系统发育分析.B.megaterium EJC-1 GAD的最适反应温度和pH分别为50 ℃和5.6.低于40 ℃,GAD在pH 5～6范围内较稳定.2.5 mmol·L-1 Mg2 对GAD活力具有显著的促进作用,活力提高了13.85%.     

酸法水解骨粉的研究

本试验以醋酸、磷酸、柠檬酸和乳酸分别作用骨粉，转化骨粉中钙为可溶性钙，四种酸转化骨钙的百分率分别为１９．３％ ，２８．８％ ，３０．７％ 和２２．８％ 。可溶性钙经浓缩干燥成为干粉状钙剂。     

毕赤酵母工程菌原果胶酶的分离纯化

采用硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤和离子交换层析等方法,对毕赤酵母工程菌发酵液中的原果胶酶进行了分离纯化,测定了其分子质量,并确定了离子交换层析法的最佳离子交换条件。结果表明,硫酸铵的饱和度为70%时,可以使原果胶酶的回收率达到71.9%,比活力为1 096.35 U/m g;经Sephadex G 75凝胶过滤,原果胶酶回收率达到57.6%,酶的比活力提高到3 762.40 U/m g;最佳离子交换条件为:0~0.5 m o l/L N aC l(缓冲体系为N oA c-HA c,pH 5.8)溶液线性洗脱、Sepharose F ast F low离子交换层析分离,在该条件下酶的比活力提高到9 743.20 U/m g,纯度为粗酶液的18.91倍,达到了电泳级;SDS-PAGE电泳结果表明,其分子质量为43.17 ku。