茉莉花JsPAL2基因的克隆与表达分析

为了研究茉莉花花香代谢相关分子机制,本研究基于茉莉花转录组测序结果,采用PCR技术从双瓣茉莉花花瓣的c DNA文库中克隆出苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia lyase,PAL)的全长c DNA,命名为Js PAL2。该c DNA的全长为2 181 bp,其中ORF为2 079 bp,编码693个氨基酸的蛋白,分子量为75 599.19 u。序列分析结果表明,该基因编码的氨基酸序列与油橄榄(Olea europaea)的PAL具有82%的同源性。利用100μmol/L的外源激素茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,Me JA)喷施成熟花苞,并采用荧光定量PCR技术检测Js PAL2在茉莉花发育过程、开放过程以及经Me JA处理过后花朵中的表达量变化。结果表明,在花蕾生长发育时期,Js PAL2的表达量随着天数的增加而升高,在5 d时达到最高;在不同开放时期,18:00花朵未开放时Js PAL2表达量最低,22:00花朵半开放时表达量最高;经外源茉莉酸甲酯处理后,Js PAL2的表达量明显增加,在处理后7 h达到最高,随后逐渐降低,推测该基因可能与茉莉花香气物质的合成有关,同时Me JA可能对其表达有诱导的作用。     

茉莉花JsGGPPS基因的克隆及生物信息学与表达分析

牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶(Geranylgerany pyrophosphate synthase,GGPPS)是萜烯类香气物质合成途径中的关键酶。采用RT-PCR和RACE相结合的方法,克隆了茉莉花牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶基因的全长cDNA(命名为JsGGPPS,GenBank登录号AIY24421.1),采用实时荧光定量PCR技术分析JsGGPPS基因在茉莉花开放过程中的表达模式。结果表明,JsGGPPS全长cDNA为1 410bp,含1 083bp完整的开放阅读框(ORF),其推导的氨基酸序列包含360个氨基酸,属于trans-isoprenyl diphosphate synthases(IPPS)和class I terpene cyclases家族,含链长控制区(CLDR)、2个天冬氨酸富集区以及其他保守区。JsGGPPS基因与独行菜Lepidium apetalum、橡胶草Taraxacum kok-saghyz的同源性分别为91%、86%。实时荧光定量PCR结果表明,茉莉花开放过程中JsGGPPS基因在晚上18:00时表达量较低,呈上调趋势,在22:00时达到最高,呈下调趋势,在翌日2:00时表达量最低,与茉莉花释香趋势相似,为深入研究茉莉花萜烯类香气物质代谢途径奠定基础。     

白茶萎凋过程中儿茶素合成关键酶基因表达分析

[目的]研究白茶萎凋过程中茶多酚、儿茶素组分含量变化与其合成途径中关键酶基因的动态表达,为优化白茶的萎凋工艺提供参考依据.[方法]以不同萎凋阶段的白茶为原料,分别采用福林酚(Folin-Ciocalten)比色法和高效液相色谱法(HPLC)测定茶多酚、儿茶素组分含量的变化,并以实时荧光定量PCR检测白茶萎凋过程中与儿茶素物质代谢合成相关基因(PAL、C4H、CHS、CHI、F3'5'H、FYH、F3H、DFR、LAR、ANS、ANR和UGGT)的相对表达量.[结果]白茶萎凋过程中茶多酚含量呈逐渐降低趋势,儿茶素组分中表儿茶素(EC)、没食子儿茶素(GC)、表没食子儿茶素(EGC)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)含量整体上呈先上升后下降的变化趋势,且均在萎凋历时32h出现最大值.实时荧光定量PCR检测结果表明,儿茶素生物合成途径关键酶基因PAL、C4H、CHI、F3H、F3'H、F35'H、DFR、LAR、ANR和UGG丁均在萎凋历时32 b呈上调表达,CH基因则随萎凋历时的增加呈下调表达趋势,ANS基因表达在整个萎凋过程中呈先上升后下降的变化趋势,在萎凋历时16 h达最大值.白茶萎凋过程中儿茶素合成途径关键基因表达水平具有调控儿茶素生物合成的作用.[结论]在白茶萎凋过程中,儿茶素生物合成途径关键酶基因PAL、C4H、F3H、FYH、DFR、LAR、ANR的表达与儿茶素组分单体EC、GC、EGC的积累规律基本一致,其最大值均出现在萎凋历时32 h,因此在制茶时可适当缩短萎凋时长,以提高白茶品质.     

茉莉花萜类合成酶基因JsTPS的克隆及其表达分析

以双瓣茉莉花[Jasminum sambac（L.）Ait]花瓣为材料,采用RT-PCR和RACE技术相结合的方法,克隆了萜类合成酶基因（JsTPS）的全长cDNA,该cDNA全长为1 884 bp,其中ORF为1 491 bp,编码496个氨基酸的蛋白,分子量56 989.7 D,与原核表达结果一致。序列分析结果表明,该基因编码的氨基酸序列与油橄榄（Olea europaea）的TPS2具有75%的同源性,同属于α-Farnesene synthase分支。采用荧光定量PCR技术检测JsTPS在茉莉花开放过程中的表达量变化,结果表明,表达量在未开放时（18：00）最低,在半开放时（22：00）达到最高。     

茉莉花氨基酸组分分析

采用氨基酸自动分析仪对台湾种单瓣茉莉花和双瓣茉莉花水解氨基酸和游离氨基酸组分进行分析。结果表明:台湾种单瓣茉莉花花蕾期与开放期的水解氨基酸总量分别为141.53 mg/g和1 48.73mg/g,游离氨基酸总量分别为4.1 7 mg/g和7.25mg/g;双瓣茉莉花花蕾期与开放期的水解氨基酸总量分别为1 33.1 8mg/g和1 24.14mg/g,游离氨基酸总量分别为5.82mg/g和5.03mg/g。台湾种单瓣茉莉花的水解氨基酸含量显著高于双瓣茉莉花,游离氨基酸含量的差异未达到显著水平。茉莉花花蕾期的游离氨基酸中EAA/TAA比值明显低于开放期。     

不同等级云南红碎茶的氨基酸组分分析

采用氨基酸自动分析仪对不同等级云南红碎茶的游离氨基酸组分进行分析,并结合感官品质鉴定。结果表明:共检测出17种氨基酸,氨基酸总量为6.14-15.24mg/g。云南红碎茶氨基酸总量和茶氨酸含量都呈现碎茶1号碎茶2号碎茶3号碎茶5号末茶的变化规律,且与感官品质得分间相关系数达0.9525和0.9294,呈显著正相关关系。     

双瓣茉莉花(Jasminum sambac(L.)Ait)开放过程香气成分的动态变化

采用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱法(HS-SPME-GC/MS)萃取、分析、鉴定双瓣茉莉花离体和活体状态开放过程中的香气组分,结果表明双瓣茉莉花中共有94种香气成分,包括28种萜烯类及其衍生物、7种烷烃类、17种酯类、5种醇类、3种醛类、3种酚胺类.主要香气成分为芳樟醇、乙酸苄酯、乙酸葑酯、α-古巴烯、吲哚、邻氨基苯甲酸甲酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯等,离体状态下有利于茉莉花的释香.根据双瓣茉莉花开放过程香气成分的动态变化规律,茉莉花茶的窨制起始时间以21:00为宜.     

白兰花萜类合成酶基因McHMGR保守区的克隆及其表达分析

以白兰(Michelia alba DC.)花瓣为材料,采用RT-PCR方法,克隆得到白兰花萜类代谢途径中3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶基因(Mc HMGR)的保守区,该c DNA保守区长为421bp,编码128个氨基酸。序列分析结果表明,该基因编码的氨基酸序列与同属植物乐昌含笑的HMGR具有99%的同源性。采用实时荧光定量PCR技术检测Mc HMGR在白兰开花过程中四个时期的的表达量变化,结果表明,表达量在盛花期最高,花芽期最低。     

茶树△12-脂肪酸去饱和酶基因FAD2和FAD6的克隆与表达分析

本研究在茶树转录组测序的基础上,以铁观音茶树的芽叶为材料,采用RT-PCR技术,克隆了茶树不饱和脂肪酸合成途径中的关键限速酶—△12-FAD(12-脂肪酸去饱和酶)基因的包含完整ORF的cDNA序列(CsFAD2和CsFAD6)。生物信息学分析结果表明,CsFAD2的全长为1 184 bp,其开放阅读框(ORF)长度1 149 bp,编码382个氨基酸,定位于内质网上,其氨基酸序列与油茶FAD2的同源性最高达97%;CsFAD6的全长为1 425 bp,其ORF长度为1 311 bp,编码436个氨基酸,定位于叶绿体上,其氨基酸序列与葡萄FAD6同源性达81%。荧光定量PCR结果表明,铁观音茶树幼苗在4℃低温胁迫处理72 h过程中,这两个基因的表达均受低温的诱导,其表达量随着处理时间的延长而升高,在处理48 h时,表达量水平最高;在100 g·L-1的PEG胁迫处理12 h过程中,这两个基因的表达均受PEG胁迫处理的诱导;在ABA(100μmol·L-1)胁迫处理72 h过程中,在处理6~24 h期间,CsFAD2的表达量显著升高,而CsFAD6的表达不受ABA处理的影响,CsFAD6的表达量在处理72 h时显著降低;在Na Cl(250 mmol·L-1)胁迫72 h过程中,CsFAD2的表达量全程降低,而CsFAD6在处理24~72 h期间表达量显著升高。