猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的克隆与原核表达

采用RT-PCR方法扩增了猪繁殖与呼吸综合征病毒临床分离株(HBKM2)的ORF5全基因,并进行了测序分析,根据0RF5的结构特点,进一步扩增了截去N端信号肽序列的ORF5(nsORF5),并将其克隆到pGEX-KG原核表达载体,构建了重组质粒pKG-ns5,经酶切和测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western-blot分析表明,克隆的nsORF5基因与谷胱甘肽转移酶(GST)基因获得了高效融合表达,表达的融合蛋白GST-nsGP5分子量约为43kD,并具有反应活性,这为进一步研究PRRSV GP5蛋白的功能及新型疫苗、血清学诊断方法的研制奠定了基础.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒HBKM2株ORF7基因的克隆、序列分析及原核表达

[目的]对猪繁殖与呼吸综合征病毒HBKM2毒株核蛋白编码基因ORF7进行研究,为进一步了解其编码蛋白的功能和研制新的血清学诊断方法奠定基础。[方法]采用RT—PCR方法扩增HBKM2株的DR胛基因,然后利用DNAStar软件包对克隆的序列进行序列分析,将ORF7基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX—KG上,构建重组表达质粒pKG—N。将重组质粒转化到大肠杆菌B121。并经IPTG诱导表达,最后利用Western-blot对表达蛋白的免疫反应活性进行鉴定。[结果]HBKM2毒株的0R刀基因长约372bp;序列分析表明与高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的同源性达99％以上;SDS—PAGE表明克隆的0R几基因在大肠杆菌中获得了高效融合表达：Western-blot分析表明,重组蛋白GST—N能够与PRRSV高免猪血清发生特异性的免疫反应。[结论]成功地扩增了ORF7基因。且GST-N融合蛋白能在大肠杆菌中高效表达。     

外源锌结合有机肥对白术生长及土壤养分的影响

以白术为试材，开展大田试验，研究了喷施外源锌和有机肥替代部分化肥对白术生长及土壤养分的影响，以期为白术科学施用肥锌肥及有机肥提供参考依据。结果表明：常规施肥组50Zn、100Zn和150Zn处理下白术锌含量和土壤速效磷含量较CK显著提高了9.23%～22.84%、15.64%～30.90%;100Zn和150Zn处理下土壤碱解氮含量相比CK显著提高27.6%、22.8%。有机肥组OM+100Zn和OM+150Zn处理下白术叶面积和叶周长均显著高于CK;OM+150Zn处理下叶片干质量较CK提高了16.67%;OM+100Zn处理下叶绿素相对含量显著高于其它处理；OM+150Zn处理下白术锌含量和速效钾含量显著高于其它处理，相比CK分别提高了38.30%、18.54%。与CK相比，有机肥组土壤碱解氮含量显著增加了18.01%～25.64%。与常规施肥组相比，有机肥组白术株高、产量、有机质和速效磷含量分别提高了8.86%～12.08%、27.24%～32.84%、16.80%～26.27%、8.19%～39.14%。综上所述，锌肥结合有机肥施用对白术生长的促进效果整体要优于单施锌肥，其中O...