黑曲霉分泌表达载体的构建以及绿色荧光蛋白的表达

采用PCR扩增得到糖化酶基因启动子（PglaA-g）、色氨酸合成酶基因终止子（TtrpC）和潮霉素抗性筛选标记基因,依次连接这些基因元件,获得黑曲 Aspergillus niger 分泌表达载体pPHT. EGFP 基因与黑曲霉表达载体pPHT连接,得到重组表达载体pPHT-EGFP.pPHT-EGFP表达载体通过原生质体转化法转化黑曲霉,经潮霉素抗性筛选、基因组PCR鉴定阳性重组转化子.荧光显微镜观察表明,绿色荧光蛋白成功表达,而且荧光的分布具有一定的规律,主要集中在菌丝顶端、膈膜以及培养基中;固体培养基发出绿色荧光,表明绿色荧光蛋白分泌到培养基中,属于分泌性表达,蛋白分泌的部位主要位于菌丝顶端.     

猪流行性腹泻病毒S1基因在毕赤酵母中的表达

为了研制一种能够高效表达猪流行性腹泻病毒S1主要抗原表位基因的新型疫苗,将S1主要抗原表位基因整合到酵母表达载体pPICZαC中,构建了重组质粒pPICZαC-S1,对重组质粒经Sac Ⅰ酶切线性化后通过电转化法转化到毕赤酵母X-33中,经Zeocin^TM抗性筛选后得到阳性转化子(pPICZαC-S1),转化子接种培养基后用甲醇进行诱导,并对诱导结果进行SDS-PAGE分析和Western blotting鉴定。结果表明,纤突蛋白主要抗原表位在毕赤酵母中成功分泌表达,表达的蛋白分子质量为42 ku,且能够与PEDV阳性血清特异性结合。     

黄羽肉鸡心包积水-肝炎综合征的诊断与防控

心包积水-肝炎综合征(Hydropericardium hepatitis syndrome,HHS),是鸡新发一种的危害较大的传染病,近年来在北方一些省份流行。2016年6月,某市一鸡场发生疑似病例,死亡率40%,经病毒分离、PCR诊断及序列测定等方法确认为该病。本次黄羽肉鸡的发病特点为发病急、死亡快,但心胞积液不明显,剖检病变极易与禽流感、新城疫等相混淆,需引起关注,根据发病特点提出鉴别诊断方法,以提高基层对本病的发现能力。     

黄羽肉鸡心包积水-肝炎综合征不同组织中病毒含量的比较

心包积水-肝炎综合征(HHS)是鸡的一种新发传染病,可导致较高的死亡率,对养鸡业构成重大威胁。本研究应用Taqman荧光PCR检测方法,对一自然病例中病死鸡不同组织样品相对病毒浓度进行了测定。结果显示不同组织平均病毒浓度从高到低依次为:肝肺脾肾肠气管胸腺心脑心胞液胰腺咽/肛。不同组织间病毒浓度相差较大。其中,肝脏的病毒浓度最高,较其他组织高出约1~4个数量级,故肝脏可作为诊断、监测及疫苗制备的首选靶组织;心胞液中病毒浓度并不高,仅为肝脏的0.22%;拭子样品病毒浓度最低,提示若采用拭子样品进行检测时,漏检的机率较大,需通过增加采样数量等方法来弥补样品灵敏度不足的问题。本研究为该病的监测、诊断和研究提供了依据。     

丹毒丝菌SpaA基因免疫保护区的克隆及其在毕赤酵母中的表达

【目的】以毕赤酵母Pichia pastoris X-33为宿主表达猪丹毒丝菌Erysipelothrix rhusiopathiae Spa A基因氨基端的免疫保护区蛋白.【方法】以采集于广东某猪场的猪丹毒丝菌为模板,根据NCBI中已发表的Spa基因c DNA序列设计1对引物,通过PCR扩增得到Spa A-N,并将其连接到表达载体p PICZαC上,得到重组表达质粒p PICZαC-Spa A-N;用Sac I酶将重组表达质粒p PICZαC-Spa A-N线性化后电转化入毕赤酵母X-33,经含博来霉素ZencinTM抗性的YPDS平板筛选和PCR鉴定的阳性转化子,用含不同浓度博来霉素抗性的YPDS平板筛选出高拷贝子并进行甲醇诱导培养,分别于诱导48、72、96 h后离心收集上清液,立即做SDS-PAGE,并进行SDS-PAGE及Western-blot试验.【结果和结论】成功克隆并表达了Spa A-N基因,构建了重组表达质粒p PICZαC-Spa A-N,并以毕赤酵母X-33为宿主成功表达了猪丹毒丝菌Spa A基因氨基端的免疫保护区蛋白.丹毒丝菌Spa A-N作为免疫保护区在酵母宿主中得以成功表达.     

一例犊牛支原体肺炎的诊断

近年来,广东地区草食动物养殖得到了较快的发展,多地从北方新引进犊牛饲养,部分新引进犊牛出现了呼吸道疾病综合征。某牛场从山东引进81头犊牛后,部分犊牛出现发烧,咳嗽、呼吸困难,跛行,拉稀等症状;死亡率达22.2%。经病原分离、PCR检测、16Sr RNA基因序列测定,诊断为犊牛支原体肺炎。证实了广东有该病存在,需引起关注。