利用PCR介导的基因置换技术构建阿维链霉菌bkdF-突变株

PCR介导的基因置换技术是一种利用λ噬菌体Red重组系统在微生物中进行基因中断的新方法。实验利用该方法快速构建基因中断载体，并成功地置换了阿维链霉菌（Streptomyces avermitilis）bkdF基因。先合成1对长度分别为58和59nt的引物，其5’端的39nt序列分别与bkdF基因两侧同源，3’端则分别与安普霉素抗性标记盒（aac（3）Ⅳ＋onT）两侧序列一致。以该引物扩增的PCR产物电转化能表达λRed重组酶且含有目标质粒的大肠杆菌（Eschcrichia．coli）菌株BW25113／pU790／pXW1224，获得了阳性重组质粒pXW1230。将该质粒中的大小为4．0kbBglⅡ目的片段插入基因置换载体pHZl35l，再接合转移至阿维链霉菌BJBM9903，筛选得到表型为Apma^RThio^S的接合子。PCR验证并对发酵产物进行HPLC和MS分析，证实该接合子为敞dkdF^-突变株。     

orfX基因整合表达在阿维链霉菌工业育种中的应用

阿维链霉菌（Streptomyces avermitilis）基因组中含有orfX基因，通过增加orfX基因剂量可以提高阿维菌素的产量。本研究以pIJ8600为出发质粒，构建了含红霉素启动子（ermEp*）和orfX结构基因DNA片段的整合型表达载体pWJ827。通过接合转移将pWJ827导入阿维菌素的工业菌株BIB9903中，得到稳定高产的重组菌株BIB0827。高效液相（HPLC）分析结果表明，与出发菌株BIB9903相比，BIB0827发酵产物阿维菌素产量提高了1.5倍，达到3350μg/mL。传代稳定性实验证明，BIB0827传代10代后依然稳定，在工业生产上有较大的应用价值。     

贝叶斯网络在泰乐菌素发酵过程中的应用

[目的]为发酵过程的动态调控提供依据。[方法]以泰乐菌素发酵过程的各发酵条件参数为特征向量,研究利用贝叶斯方法来预测发酵过程终产量的准确度。[结果]通过用泰乐菌素发酵数据学习出的贝叶斯网络能较好地指导发酵过程中的工艺条件,取得了较好的预测效果。利用学习的贝叶斯网络能对发酵产物产量进行有效预测,对发酵过程有很好的指导意义。[结论]贝叶斯网络在微生物发酵生产中具有良好的预测性能,具有很好的实用价值和应用前景。     

提高耐热链霉菌转化泰乐菌素能力的分子改造与育种

BIB0830是将泰乐菌素转化为乙酰异戊酰泰乐菌素(AIV)的耐热链霉菌(Streptomyces thermotolerans)工业菌株。以pIJ8600为载体分别构建了acyB1-B2基因整合型表达载体pBIB425和带红霉素突变启动子ermEp*的红霉素抗性ermE基因整合型表达载体pBIB304。通过大肠杆菌(Escherichia coli)-链霉菌属间接合转移分别将pBIB425、pBIB304和pBIB308(耐热链霉菌的nsdA基因中断载体)导入工业菌株BIB0830,抗性筛选分别得到接合子BIB425、BIB304和BIB308。经PCR验证均为阳性克隆。摇瓶发酵结果表明,与出发菌株BIB0830相比,BIB425和BIB308泰乐菌素转化率分别提高了14%和22%,而BIB304则无明显影响。     

肉桂地链霉菌接合转移体系的构建及nsdA基因中断对其次级代谢的影响

以pSET152和pHL212为出发质粒，通过供体大肠杆菌ET12567（pUZ8002）和S17-1属间接合转移肉桂地链霉菌（Streptomyces cinnamonensis），首次构建并优化了肉桂地链霉菌的接合转移系统。利用PCR介导的基因置换技术快速构建了肉桂地链霉菌nsdA基因 （negative regulator of Streptomyces differentiation）中断载体，通过接合转移导入肉桂地链霉菌工业菌株BIB2005，筛选得到一株遗传稳定表型为AmR、KmS的接合子BIB309。PCR分析结果显示该接合子即为nsdA中断突变株。与出发工业菌株相比，在摇瓶水平上nsdA中断突变株BIB309莫能菌素产能提高了2.7倍。     

黄霉素补糖工艺的试验

为了降低黄霉素生产成本,实现用补糖工艺替代补油工艺生产黄霉素,我们对黄霉素发酵补糖工艺中采用的3种不同补糖方式进行了试验.结果表明,采用根据总糖消耗量补糖法的效价比采用间歇补糖法、连续恒速补糖法的效价分别高24.2%和13.7%.采用根据总糖消耗量补糖法与黄霉素发酵传统补油工艺相比,平均效价相当,但是罐批生产成本却比其低35%.     

食用菌菌株的长期保藏方法

食用菌保藏的方法有矿油保藏、液氮超低温保藏等，适合食用菌长期保藏的方法是液氮超低温保藏，将几年来采用冷冻真空干燥保藏、液氮超低温保藏和低温冰箱冷冻保藏的食用菌菌种进行了复苏实验，液氮超低温保藏和低温冰箱冷冻保藏两种保藏方法的存活率均为100％，低温冰箱冷冻保藏可以节省资金，实用于食用菌研究和小型食用菌栽培的菌种保藏。     

塔萨虫霉及其发酵产物防治蚜虫研究初报

塔萨虫霉 Entomophthora thaxteriana(Petch)Hall et Bell是一种世界性分布的蚜虫类病原真菌,国外对此菌及其用于蚜虫防治已有大量的研究,国内尚无报道。 1988年6月,作者在连续几天阴雨后,于北京市海淀区东北旺乡的甘蓝上发现桃蚜(Myzus persicae)大量死亡。作者从死亡虫体上分离获得此菌,经鉴定,确认是塔